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《植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、植物原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)概念及研究進(jìn)展原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體(protoplast)： 脫去細(xì)胞壁、裸露的細(xì)胞。又稱(chēng)原生質(zhì)球 原生質(zhì)體是為質(zhì)膜所包圍的裸露細(xì)胞。亞原生質(zhì)體(subprotoplast)在原生質(zhì)體分離過(guò)程中，有時(shí)會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)含物的斷裂而形成的一些較小的原生質(zhì)體。它可以具有細(xì)胞核，也可不具有細(xì)胞核。核質(zhì)體(nuclearplast)由原生質(zhì)膜和薄層細(xì)胞質(zhì)包圍細(xì)胞核形成的小原生質(zhì)體。也稱(chēng)為微小原生質(zhì)體。胞質(zhì)體(cytoplast)不含細(xì)胞核，而僅含有細(xì)胞質(zhì)的原生質(zhì)體。ProtoplastsystemOrganogenesisRegenerativeabilityO
2、ntogenicprocessesCelldifferentiationSomaticgeneticsCellphysiologyCellcloningOrganelle,DNAuptakeCellfusion應(yīng)用植物細(xì)胞育種中的核質(zhì)替換細(xì)胞質(zhì)雜種的獲得遠(yuǎn)緣雜交創(chuàng)造新物種細(xì)胞細(xì)胞器的互作研究意義植物原生質(zhì)體的分離和培養(yǎng)材料預(yù)處理原生質(zhì)體分離的方法原生質(zhì)體純化原生質(zhì)體活力測(cè)定影響原生質(zhì)體數(shù)量和活力的因素原生質(zhì)體培養(yǎng)方法影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素原生質(zhì)體再生過(guò)程Flash用于分離原生質(zhì)體的材料材料預(yù)處理用黑暗處理、低溫處理和不同光質(zhì)照射等方法，可提高某些材料原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力。☆龍膽試管苗的葉片用4
3、oC處理較好。☆甘蔗植株必須先在黑暗下培養(yǎng)12h后分離的原生質(zhì)體才能分裂?！铖R鈴薯試管苗葉片需在黑暗下處理48h后分離原生質(zhì)體，才能獲得高產(chǎn)量。機(jī)械分離法：先將細(xì)胞放在高滲糖溶液中預(yù)處理，待細(xì)胞發(fā)生輕微質(zhì)壁分離，原生質(zhì)體收縮成球形后，再用機(jī)械法磨碎組織，從傷口處可釋放出完整的原生質(zhì)體。缺點(diǎn)：獲得完整的原生質(zhì)體的數(shù)量比較少，能夠用此法產(chǎn)生原生質(zhì)體的植物種類(lèi)受到限制。優(yōu)點(diǎn)：該方法可避免酶制劑對(duì)原生質(zhì)體的破壞作用。酶解分離法：指將材料放入能降解細(xì)胞壁的混合等滲酶液中保溫一定時(shí)間，在酶液的作用下，細(xì)胞壁被降解，從而獲得大量有活力的原生質(zhì)體的方法。常用的酶種類(lèi)：纖維素酶類(lèi)（纖維素酶、半纖維素酶、崩潰酶[
4、Driselase]）、果膠酶類(lèi)（果膠酶和離析酶[Macerozyme]）、蝸牛酶和胼胝質(zhì)酶。酶來(lái)源生產(chǎn)廠(chǎng)家纖維素酶類(lèi)OnozukaR-10綠色木霉YakultHonshaCo.Ltd.,Tokyo,JapanCellulysin綠色木霉Calbiochem.,SanDiego,CA92037,USADriselaseIrpexlutensKayowaHakkoKogyoCo.,Tokyo,Japan酶來(lái)源生產(chǎn)廠(chǎng)家果膠酶類(lèi)MacerozymeR-10根霉YakultHonshaCo.Ltd.,Tokyo,JapanPectinase黑曲霉SigmaChemicalCo.PectolyaseY-
5、23黑曲霉SeishinPharm.Co.Ltd.,Tokyo,Japan半纖維素酶RhozymeHP-150黑曲霉RohmandHassCo.,Rhiladelphia,UAS酶解法的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：獲得量大，適用廣泛。缺點(diǎn)：商品酶制劑均含有核酸酶、蛋白酶、過(guò)氧化物酶以及酚類(lèi)物質(zhì)。會(huì)影響所獲原生質(zhì)體的活力。沉降法漂浮法不連續(xù)梯度法原生質(zhì)體純化的方法飄浮法Protoplast采用比原生質(zhì)體密度大的高滲溶液（蔗糖、Percoll、Ficoll），使原生質(zhì)體漂浮在液體表層的純化方法。優(yōu)點(diǎn)：可以避免分離的原生質(zhì)體因震蕩被組織碎片撞擊而破損。所用藥品簡(jiǎn)單，成本低。缺點(diǎn)及補(bǔ)救措施：對(duì)離心力要求比較嚴(yán)格，掌握
6、不好，原生質(zhì)體則不易漂浮?？刹捎貌煌瑵舛群筒煌x心速度分次漂浮的方法。沉降法利用比重原理，在具有一定滲透壓的溶液中，先進(jìn)行過(guò)濾然后低速離心，使純凈完整的原生質(zhì)體沉積于試管底部。優(yōu)缺點(diǎn)：純化原生質(zhì)體比較簡(jiǎn)單。由于原生質(zhì)體沉積于試管底部，造成相互擠壓，常引起原生質(zhì)體的破碎。又稱(chēng)界面法，采用兩種密度不同的溶液形成不連續(xù)梯度，通過(guò)離心使原生質(zhì)體與破損細(xì)胞分別處于不同液相中，從而純化原生質(zhì)體的方法。優(yōu)點(diǎn)：可以收集到數(shù)量較大的純凈原生質(zhì)體，同時(shí)避免收集過(guò)程中原生質(zhì)體因相互擠壓而破碎。12mL碎片帶含原生質(zhì)體帶0.6mL0.45M蔗糖0.45M甘露醇不連續(xù)梯度法原生質(zhì)體鑒定低滲爆破法熒光增白劑法(calco
7、flowerwhite0.1%)原生質(zhì)體活力測(cè)定形態(tài)識(shí)別形態(tài)完整、富含細(xì)胞質(zhì)、顏色新鮮的正常球形，放入低滲溶液中，可正常膨大。原生質(zhì)體活力測(cè)定熒光顯微鏡識(shí)別(FDA法)FDA(fluoresceindiacetate)本身不發(fā)熒光也不具有極性，能自由穿過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜?；罴?xì)胞內(nèi)FDA可以被酯酶裂解，將能發(fā)熒光的極性部分釋放出來(lái)。熒光素則不能自由穿越質(zhì)膜，在完整的活細(xì)胞內(nèi)積累。使用濃度：0.01%原生質(zhì)體
