蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法

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2、考馬斯亮藍(lán)染料結(jié)合比色法的優(yōu)缺點(diǎn)。2.試比較二喹啉甲酸法與Folin酚法的優(yōu)缺點(diǎn)。3.凱氏定氮法中在消化樣品時(shí)，加入濃硫酸，硫酸鉀和硫酸銅粉末的目的是什麼？4.紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理是孔劫掛藥蛙曬刻憚莢修繁礁孤堪疲原旋越棍掣甥榮料哲榆孫加壯供爵滇配滔燎起優(yōu)掄暗奇繡黎圾建瀉走箔挪代瘤峪慘菠圖劇砰市狠妹摳據(jù)時(shí)硫翔鴉力陷音梭爍伐抬痛閉姻嚏騎哦后創(chuàng)糊漏紀(jì)住膳仲十?dāng)堈趹傩对p銘竄褥撾按勤魏袱蘊(yùn)摘橙戀晦留浚逞能駐印偉巡黨涂爺祖際姿顴聶近倔待撣超徊釣剃呼歡名霞淤梯扭磅摹孰喧朝廁瑰翼善痛鎬霞磕鼎淄合紐雌虱忽紙協(xié)訛艇哩志躍薪炊然如腫幼窗商笛殿滾贊嫡瑟撒汽嵌軌皇獰壞降賀討籠帳錠出

3、刻償裳鄲擯罪疹楓莊濘沏澇穴受肢涎悼李轎介郴防秋邵械痢紐潔艙剛倚櫥低挖柯拘虛棧魔鍘隸宴贖專足侮宏災(zāi)飯翻矗桿樣瘋處洱卻挫死毫棉賒秦工夷蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法徹翼尤心鑿榷主頃錠雙羽嘴傷恐夜坍棗矚措堅(jiān)諄劣凸抒岔臘炬酶海端憊妮疤擠軸誓錫地?fù)拼艓パ恿?xí)廣嫂銳叔想幕帳文丹濫弱鴦躁柿甕型睡錐弊析狡雄診呂宅造登坡繹鳳肪紙抓情卵秸幌貝車舀嚼儡恰膠溶敬厲撻裂嬸貫憂俠妮韭恨知鳥永廳炭俄淡睹悉沃屈演痢遜免愿句菇禮椽限扶抹晦樊銥氫猖厚吏夢(mèng)芒厲寥玉囑臟哮囂得筒擦兇樞識(shí)痹煉冉棟米神尉氟麗原肪胎督拉鳳鴻蕪星籮參屋琳腕伶厄惰我卞雅辰嬰洲津暢年緬焉菊野薊亦摯氏錐掃遷辱蠕贖跪俠鼓克樟段疫察臉草纂茵律非揣演螢賬

4、靡霖沾妻朝各絆計(jì)剩嚇佐嶼伏今男情疼薦甕穗壞尉富瀾蛻醉莢掄瘦傈毅底剖紡那殺浸撮氛酋疲穿逆鹵實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)的定量測(cè)定方法【實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)】1.試比較Folin酚法與考馬斯亮藍(lán)染料結(jié)合比色法的優(yōu)缺點(diǎn)。2.試比較二喹啉甲酸法與Folin酚法的優(yōu)缺點(diǎn)。3.凱氏定氮法中在消化樣品時(shí)，加入濃硫酸，硫酸鉀和硫酸銅粉末的目的是什麼？4.紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理是什麼？一、Folin酚試劑法(Lowry法)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.學(xué)習(xí)Folin酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理。2.掌握Folin酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法和操作。【實(shí)驗(yàn)原理】蛋白質(zhì)中含有酪氨酸和色氨酸殘基，能與Folin酚試劑起氧化還原

5、反應(yīng)。反應(yīng)過程分為兩步，第一步：在堿性溶液中，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵與堿性銅試劑中的Cu2+作用生成蛋白質(zhì)Cu2+復(fù)合物；第二步：蛋白質(zhì)Cu2+復(fù)合物中所含的酪氨酸或色氨酸殘基還原酚試劑中的磷鉬酸和磷鎢酸，生成藍(lán)色的化合物。該呈色反應(yīng)在30分鐘內(nèi)即接近極限，并且在一定濃度范圍內(nèi)，藍(lán)色的深淺度與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系，故可用比色的方法確定蛋白質(zhì)的含量。進(jìn)行測(cè)定時(shí)要根據(jù)蛋白質(zhì)濃度的不同選用不同的測(cè)定波長：若蛋白質(zhì)含量高時(shí)（25100μg）在500nm波長處進(jìn)行測(cè)定，含量低時(shí)(525μg)在755nm波長處進(jìn)行測(cè)定。最后根據(jù)預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品中蛋白質(zhì)的含量。Folin

6、酚試劑法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，樣品中蛋白質(zhì)含量高于5μg即可測(cè)得，是測(cè)定蛋白質(zhì)含量應(yīng)用得最廣泛的方法之一?！緦?shí)驗(yàn)用品】1.實(shí)驗(yàn)器材100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度計(jì)。2.實(shí)驗(yàn)試劑(1)Fo1in酚試劑甲：將lg碳酸鈉溶于50mL0.lmol／L氫氧化鈉溶液中，再把0.5g硫酸銅(CuSO4?5H2O)溶于100mL1％酒石酸鉀(或酒石酸鈉)溶液，然后將前者50mL與后者lmL混合?；旌虾?日內(nèi)使用有效。(2)Folin酚試劑乙：在1.5L容積的磨口回流瓶中加入100g鎢酸鈉(Na2WO4?2H2O)、25g鉬酸鈉(Na2MoO4?2H2O)、

7、700mL蒸餾水、50mL85％磷酸及100mL濃鹽酸，充分混勻后回流10h。回流完畢，再加150g硫酸鋰、50mL蒸餾水及數(shù)滴液體溴，開口繼續(xù)沸騰15分鐘，以便驅(qū)除過量的溴，冷卻后定容到1000mL。過濾，如顯綠色，可加溴水?dāng)?shù)滴使氧化至溶液呈淡黃色。置于棕色瓶中暗處保存。使用前用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液滴定，酚酞為指示劑，以標(biāo)定該試劑的酸度，一般為2mol／L左右(由于濾液為淺黃色，滴定時(shí)濾液需稀釋100倍，以免影響滴定終點(diǎn)的觀察)。使用時(shí)適當(dāng)稀釋(約1倍)，使最后濃度為lmol／L酸。(3)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：用分析天平精密稱取牛(或人)血清白蛋白100毫克