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1、低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定方法研究進(jìn)展 摘要血清或血漿中低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）與冠心病（CDH）發(fā)生和動(dòng)脈粥樣硬化損傷呈正相關(guān)，而且是美國國家膽固醇教育計(jì)劃（NCEP）作為脂類疾病分類和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的一個(gè)重要指標(biāo)。LDL-C也是選擇藥物治療和預(yù)后方面的一個(gè)十分有意義的臨床指標(biāo)，國內(nèi)外都在研究和開發(fā)行之有效、可靠的標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)定方法。本文對(duì)其有關(guān)的測(cè)定方法和研究進(jìn)展作綜述。 關(guān)鍵詞：低密度脂蛋白膽固醇；方法學(xué)；心血管疾病 臨床和流行病學(xué)研究證明血清中LDL-C與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化有密切的正相關(guān)[1]。在1986年
2、病理學(xué)家們就研究證明LDL-C濃度越高時(shí)動(dòng)脈粥樣硬化損傷的程度越大，粥樣硬化程度小時(shí)，測(cè)到血清中LDL-C也低[2,3]?！ DL是一組不均一的脂蛋白顆粒，一般認(rèn)為L(zhǎng)DL的漂浮密度為1.006～1.063，且包括了中間密度脂蛋白（LDL）1.006～1.019及Lp(a)1.050～1.080。LDL中蛋白含量約為20％～25％，主要是載脂蛋白B-100（ApoB-100），而載脂蛋白E（ApoE）和載脂蛋白CⅡ（ApoCⅡ）含量很少。膽固醇的含量約是血清中總量的三分之二。LDL是通過受體途徑進(jìn)行降解，如過量
3、時(shí)可以導(dǎo)致巨噬細(xì)胞和其他吞噬細(xì)胞變成泡沫細(xì)胞，這被認(rèn)為是與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)的因素。因此，LDL-C的測(cè)定結(jié)果直接影響到分類和治療。美國的NCEP專家組以LDL-C濃度將成人、小孩、青少年各分為：成人在3.37mmol/L(1300mg/L)以下為合適水平，在3.37～4.12mmol/L(1300～1590mg/L)間作為中危水平，高于4.14mmol/L(1600mg/L)時(shí)作為高危水平；小孩和青少年在2.85mmol/L(1100mg/L)以下為合適水平，在2.85～3.34mmol/L(1100～1290
4、mg/L)為中危水平，高于3.37mmol/L(1300mg/L)為高危水平[4]。為提高LDL-C測(cè)檢水平，國內(nèi)外對(duì)LDL-C測(cè)定方法進(jìn)行廣泛的研究并不斷改善，現(xiàn)將有關(guān)方法研究進(jìn)展綜述如下： 1等密度和密度梯度超速離心法 血清中的各種脂蛋白的分離是LDL-C測(cè)定的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。由于各種脂蛋白的大小、密度和組成及功能都有很大的不同。超速離心技術(shù)就是利用脂蛋白各種成分的密度不同將它們分離，是脂蛋白分離的主要方法。 1950年Delalla和Gofman首次報(bào)道等密度超速離心法。在實(shí)驗(yàn)室中一般采用βQuant
5、ification（β6Q）法，它利用1.006的臨界分離液，在離心力為10900g時(shí)離心18h，將血漿分成上下兩部分，上清液為VLDL和乳糜顆粒，下面為IDL、LDL和HDL。用試管切開技術(shù)將上下液體分開。下面部分再采用化學(xué)沉淀法將HDL和LDL及IDL分開，分別用酶法測(cè)定膽固醇。這方法已被臨床實(shí)驗(yàn)室作為參考方法。而且還可以根據(jù)需要改變分離液密度，當(dāng)密度提高為1.019，可以將IDL與LDL和HDL分開，也可提高到1.21，分離出HDL等。但在選擇脂蛋白分離切點(diǎn)系指它們與緩沖液混和物的密度，而不是脂蛋白自身的
6、密度?！ ×硗庥袌?bào)道用密度梯度超速離心法[5]。這種方法是將血清加入到已有不同密度梯度的分離液中，進(jìn)行超速離心后，血清中脂蛋白的各種成份可以轉(zhuǎn)移到各自相等密度的相等的區(qū)域。這種方法可以一次將脂蛋白中的各種成份分離。而不足之處是要求離心時(shí)間很嚴(yán)格，分開各種組份較困難。根據(jù)離心轉(zhuǎn)子的不同，可以分為水平轉(zhuǎn)子，垂直轉(zhuǎn)子以及固定角度轉(zhuǎn)子。水平轉(zhuǎn)子在實(shí)驗(yàn)中已被證明分離效果最好，但要求離心時(shí)間長(zhǎng)（17～66h）；垂直轉(zhuǎn)子可以縮短時(shí)間（45min～3h），由于轉(zhuǎn)動(dòng)距離小，會(huì)有微量丟失；在等密度超速離心中首選固定角度轉(zhuǎn)子，如在密
7、度梯度超速離心中使用時(shí)，離心時(shí)間要比垂直轉(zhuǎn)子稍長(zhǎng)?！ ∵@兩種方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求條件高，一般實(shí)驗(yàn)室都難以應(yīng)用。雖然現(xiàn)在有很多改良方法，克服了傳統(tǒng)方法的部分缺點(diǎn)，但分離的效果仍不能同傳統(tǒng)方法比。所有的超速離心法都有它們的局限性，它們所測(cè)得的結(jié)果仍是NCEP作為分類和治療的指標(biāo)?！ ?譜法 根據(jù)脂蛋白分子的大小和親和性有很大的不同，利用層析技術(shù)對(duì)脂蛋白進(jìn)行分離。目前有多種色譜儀和分離柱被用于脂蛋白的分離。而瓊脂糖層析技術(shù)和Toyasoda的高壓凝膠層析技術(shù)使用最普遍。這種方法是非破壞性，可以回收各種成份，有報(bào)道[6]
8、LDL-C的回收率可以達(dá)到80％～98％，但穩(wěn)定性較差。目前這種技術(shù)也在不斷完善，但要求實(shí)驗(yàn)條件高，操作繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)，儀器昂貴，難以在臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用?！ ?電泳6 電泳技術(shù)是基于脂蛋白分子所帶的電荷和分子量大小不同進(jìn)行分離，早期這種技術(shù)在臨床實(shí)驗(yàn)室普遍用于定性分析，直接觀察血清脂蛋白譜?，F(xiàn)在已不再推廣使用，大量實(shí)驗(yàn)證明電泳電量法所得的結(jié)果不能令人滿意，并且發(fā)現(xiàn)與常規(guī)實(shí)驗(yàn)測(cè)得的結(jié)果有誤
