低密度脂蛋白膽固醇測定方法研究進展

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1、低密度脂蛋白膽固醇測定方法研究進展　摘要血清或血漿中低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）與冠心?。–DH）發(fā)生和動脈粥樣硬化損傷呈正相關(guān)，而且是美國國家膽固醇教育計劃（NCEP）作為脂類疾病分類和風險預測的一個重要指標。LDL-C也是選擇藥物治療和預后方面的一個十分有意義的臨床指標，國內(nèi)外都在研究和開發(fā)行之有效、可靠的標準化測定方法。本文對其有關(guān)的測定方法和研究進展作綜述?！　￡P(guān)鍵詞：低密度脂蛋白膽固醇；方法學；心血管疾病　　臨床和流行病學研究證明血清中LDL-C與冠狀動脈粥樣硬化有密切的正相關(guān)[1]。在1986年病理學家們就研究證明LDL-C濃度越高時動脈粥樣硬化損傷的程度越大，粥樣硬化程度小

2、時，測到血清中LDL-C也低[2,3]?！　DL是一組不均一的脂蛋白顆粒，一般認為LDL的漂浮密度為1.006～1.063，且包括了中間密度脂蛋白（LDL）1.006～1.019及Lp(a)1.050～1.080。LDL中蛋白含量約為20％～25％，主要是載脂蛋白B-100（ApoB-100），而載脂蛋白E（ApoE）和載脂蛋白CⅡ（ApoCⅡ）含量很少。膽固醇的含量約是血清中總量的三分之二。LDL是通過受體途徑進行降解，如過量時可以導致巨噬細胞和其他吞噬細胞變成泡沫細胞，這被認為是與動脈粥樣硬化有關(guān)的因素。因此，LDL-C的測定結(jié)果直接影響到分類和治療。美國的NCEP專家組以LDL-C濃

3、度將成人、小孩、青少年各分為：成人在3.37mmol/L(1300mg/L)以下為合適水平，在3.37～4.12mmol/L(1300～1590mg/L)間作為中危水平，高于4.14mmol/L(1600mg/L)時作為高危水平；小孩和青少年在2.85mmol/L(1100mg/L)以下為合適水平，在2.85～3.34mmol/L(1100～1290mg/L)為中危水平，高于3.37mmol/L(1300mg/L)為高危水平[4]。為提高LDL-C測檢水平，國內(nèi)外對LDL-C測定方法進行廣泛的研究并不斷改善，現(xiàn)將有關(guān)方法研究進展綜述如下：　　1等密度和密度梯度超速離心法　　血清中的各種脂蛋白

4、的分離是LDL-C測定的一個重要環(huán)節(jié)。由于各種脂蛋白的大小、密度和組成及功能都有很大的不同。超速離心技術(shù)就是利用脂蛋白各種成分的密度不同將它們分離，是脂蛋白分離的主要方法?！　?950年Delalla和Gofman首次報道等密度超速離心法。在實驗室中一般采用βQuantification（βQ）法，它利用1.006的臨界分離液，在離心力為10900g時離心18h，將血漿分成上下兩部分，上清液為VLDL和乳糜顆粒，下面為IDL、LDL和HDL。用試管切開技術(shù)將上下液體分開。下面部分再采用化學沉淀法將HDL和LDL及IDL分開，分別用酶法測定膽固醇。這方法已被臨床實驗室作為參考方法。而且還可以根

5、據(jù)需要改變分離液密度，當密度提高為1.019，可以將IDL與LDL和HDL分開，也可提高到1.21，分離出HDL等。但在選擇脂蛋白分離切點系指它們與緩沖液混和物的密度，而不是脂蛋白自身的密度?！　×硗庥袌蟮烙妹芏忍荻瘸匐x心法[5]。這種方法是將血清加入到已有不同密度梯度的分離液中，進行超速離心后，血清中脂蛋白的各種成份可以轉(zhuǎn)移到各自相等密度的相等的區(qū)域。這種方法可以一次將脂蛋白中的各種成份分離。而不足之處是要求離心時間很嚴格，分開各種組份較困難。根據(jù)離心轉(zhuǎn)子的不同，可以分為水平轉(zhuǎn)子，垂直轉(zhuǎn)子以及固定角度轉(zhuǎn)子。水平轉(zhuǎn)子在實驗中已被證明分離效果最好，但要求離心時間長（17～66h）；垂直轉(zhuǎn)子可

6、以縮短時間（45min～3h），由于轉(zhuǎn)動距離小，會有微量丟失；在等密度超速離心中首選固定角度轉(zhuǎn)子，如在密度梯度超速離心中使用時，離心時間要比垂直轉(zhuǎn)子稍長?！　∵@兩種方法對實驗室要求條件高，一般實驗室都難以應用。雖然現(xiàn)在有很多改良方法，克服了傳統(tǒng)方法的部分缺點，但分離的效果仍不能同傳統(tǒng)方法比。所有的超速離心法都有它們的局限性，它們所測得的結(jié)果仍是NCEP作為分類和治療的指標?！　?譜法　　根據(jù)脂蛋白分子的大小和親和性有很大的不同，利用層析技術(shù)對脂蛋白進行分離。目前有多種色譜儀和分離柱被用于脂蛋白的分離。而瓊脂糖層析技術(shù)和Toyasoda的高壓凝膠層析技術(shù)使用最普遍。這種方法是非破壞性，可以回收

7、各種成份，有報道[6]LDL-C的回收率可以達到80％～98％，但穩(wěn)定性較差。目前這種技術(shù)也在不斷完善，但要求實驗條件高，操作繁瑣，時間長，儀器昂貴，難以在臨床實驗室應用?！　?電泳　　電泳技術(shù)是基于脂蛋白分子所帶的電荷和分子量大小不同進行分離，早期這種技術(shù)在臨床實驗室普遍用于定性分析，直接觀察血清脂蛋白譜。現(xiàn)在已不再推廣使用，大量實驗證明電泳電量法所得的結(jié)果不能令人滿意，并且發(fā)現(xiàn)與常規(guī)實驗測得的結(jié)果有誤差。