化療藥物表柔比星促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的機(jī)制

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1、學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)201512263057密級(jí)公開(kāi)碩士學(xué)位論文化療藥物表柔比星促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的機(jī)制作者姓名:張曉麗導(dǎo)師姓名:馮若副教授學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱:人體解剖與組織胚胎學(xué)培養(yǎng)院系:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院完成時(shí)間:2018年4月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEpirubicinstimulatesgastriccancercellsmigrationandinvasionanditsunderlyingmechanismsByXiaoliZhangSupervisor:

2、Prof.RuoFengDepartmentofHistologyandEmbryologyBasicMedicalCollegeApril,2018原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者:日期:年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品,知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文

3、的規(guī)定,同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱;本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí),第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者:日期:年月化療藥物表柔比星促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲的機(jī)制研究生:張曉麗導(dǎo)師:馮若鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院組織胚胎學(xué)教研室鄭州450001摘要研究背景和目的大多數(shù)腫瘤患者到患病晚期都會(huì)出現(xiàn)癌細(xì)胞的遷移和侵襲,這也是導(dǎo)致

4、患者最終死亡的主要原因。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活與胃癌細(xì)胞EMT的發(fā)生密切相關(guān),它可下調(diào)E-鈣黏蛋白(E-cadherin)的表達(dá),提高N-鈣黏蛋白(N-cadherin)和基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移與侵襲。近年來(lái),化療藥物加劇腫瘤細(xì)胞多種惡性生物學(xué)行為的現(xiàn)象越來(lái)越受到重視。已有研究表明,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,化療藥物可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞和宿主抗腫瘤免疫系統(tǒng),進(jìn)而促進(jìn)腫瘤播散。此外,化療藥物奧沙利鉑可導(dǎo)致結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,進(jìn)而促進(jìn)結(jié)腸癌遷移和侵襲。然而,化療藥物表柔比星對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響尚

5、不清楚。在本研究中,我們用臨床常用的化療藥物表柔比星,分別處理胃癌細(xì)胞系BGC823(低分化)和SGC7901(中度分化),進(jìn)而探究化療藥物表柔比星對(duì)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力的影響及其可能機(jī)制。I材料和方法1.實(shí)驗(yàn)所用胃癌細(xì)胞系BGC823(低分化)和SGC7901(中等分化)由鄭州大學(xué)組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室提供。2.噻唑藍(lán)比色分析法(MTT)測(cè)定表柔比星對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷性。3.倒置光學(xué)顯微鏡拍照,觀察表柔比星對(duì)胃癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。4.檢測(cè)表柔比星對(duì)胃癌細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響。(1)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)表柔比星對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的影響。(2)Westernblot

6、ting檢測(cè)表柔比星作用后,與胃癌細(xì)胞遷移侵襲相關(guān)的蛋白MMP-2、MMP-9以及促血管生成因子VEGF的表達(dá)量變化。5.探究表柔比星促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移侵襲的機(jī)制。(1)Westernblotting檢測(cè)表柔比星作用后,胃癌細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin及p-Akt的蛋白表達(dá)量變化。(2)胃癌細(xì)胞用PI3K/Akt通路抑制劑Wortmannin(1μmol/L)或Ly294002(25μmol/L)處理后,Westernblotting檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)量的變化。II結(jié)果:1.表柔比星可誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞死亡,且具有濃度依賴性和時(shí)間依賴性。MTT結(jié)果

7、顯示:不同濃度的表柔比星處理胃癌細(xì)胞,其死亡率隨表柔比星濃度的增加而升高,1μg/ml組細(xì)胞死亡率達(dá)到50%左右;用1μg/ml的表柔比星作用于胃癌細(xì)胞不同時(shí)間后,隨著時(shí)間的增加,胃癌細(xì)胞死亡率不斷升高,24h時(shí)死亡率接近50%。2.表柔比星誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變。光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果顯示:表柔比星處理后的胃癌細(xì)胞,細(xì)胞間連接減弱,細(xì)胞形態(tài)拉長(zhǎng)、分散,呈現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞表型。3.表柔比星促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移和侵襲。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,表柔比星處理后的胃癌細(xì)胞劃痕愈合速度明顯增強(qiáng)(P<0.01)。Westernblotting結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,表柔比

8、星作用后,胃癌細(xì)胞中MMP-9及VEGF的表達(dá)量升高

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