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《A型肉毒毒素鼻腔給藥對(duì)氯化鋰—匹魯卡品大鼠癲癇模型海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?01622444023725密級(jí)公開專業(yè)碩士學(xué)位論文A型肉毒毒素鼻腔給藥對(duì)氯化鋰-匹魯卡品大鼠癲癇模型海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用作者姓名:黃智導(dǎo)師姓名:連亞軍教授專業(yè)學(xué)位名稱:神經(jīng)病學(xué)碩士培養(yǎng)院系:第一臨床醫(yī)院完成時(shí)間:2018年3月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster(doctor)TheProtectionofBotulinumNeurotoxinAonHippocampalNeuronsinLithiumChloride-Piloca
2、rpineRatEpilepticModelviaIntranasalAdministrationByZhiHuangSupervisorProfessorYajunLianDepartmentofNeurologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch2018A型肉毒毒素鼻腔給藥對(duì)氯化鋰-匹魯卡品大鼠癲癇模型海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用碩士生黃智導(dǎo)師連亞軍教授鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科鄭州450052摘要研究背景:癲癇(epilepsy)是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,頻發(fā)的癲癇發(fā)作可導(dǎo)致腦部嚴(yán)重的損害、意外傷害及
3、精神創(chuàng)傷等,給患者、家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。目前我國的癲癇的患病率約7.2‰,存在900余萬的癲癇患者,雖經(jīng)正規(guī)的抗癲癇藥物治療,仍有近1/3患者的癲癇發(fā)作難以得到有效的控制,發(fā)展為難治性癲癇,其中顳葉癲癇(Temporallobeepilepsy,TLE)是最常見的難治性癲癇。氯化鋰-匹魯卡品大鼠癲癇模型是Honchar于1983年首次報(bào)道,該模型與人類顳葉癲癇模型在神經(jīng)電生理、神經(jīng)元損傷、行為學(xué)表現(xiàn)等方面相似,是目前研究顳葉癲癇和癲癇持續(xù)狀態(tài)常用的動(dòng)物模型之一。A型肉毒毒素(BotulinumneurotoxinA,BoNT/A)是一種由厭氧梭狀芽孢桿菌產(chǎn)生的神經(jīng)
4、毒素蛋白,可特異性酶切突觸囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白,進(jìn)而抑制突觸前膜神經(jīng)遞質(zhì)釋放,抑制Na+通道,降低神經(jīng)元興奮性,為抗癲癇作用提供了理論依據(jù)。近來研究表明顱內(nèi)海馬區(qū)注射肉毒毒素(Botulinumneurotoxin,BoNT)可抑制急性期癲癇發(fā)作,減輕海馬神經(jīng)元損傷,減少慢性期癲癇發(fā)作頻率,進(jìn)一步證實(shí)了BoNT可作為一種潛在的抗癲癇藥物。然而,既往的研究均采用顱內(nèi)注射給藥方式,存在創(chuàng)傷性、操作復(fù)雜、易感染、不利于長期給藥等弊端,且未進(jìn)一步探討B(tài)oNT的作用機(jī)制。相較于顱內(nèi)注射,鼻腔給藥是一種方便、無創(chuàng)性的給藥方式,并可繞過血腦屏障,快速進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng),滿足了慢性疾病需長期
5、給藥的需求。目前對(duì)BoNT/A抑制癲癇發(fā)作的具體機(jī)制、能否通過I鼻腔給藥減少癲癇持續(xù)狀態(tài)誘發(fā)的神經(jīng)元損傷,還有待進(jìn)一步研究。研究目的:本課題通過觀察氯化鋰-匹魯卡品致癇大鼠神經(jīng)元形態(tài)學(xué)及自噬、凋亡相關(guān)蛋白Beclin-1、Bax,Caspase-3及Bcl-2表達(dá)水平的改變,探討癲癇誘發(fā)神經(jīng)元損傷的機(jī)制;探究鼻腔滴注BoNT/A給藥方式的可行性,觀察其對(duì)致癇大鼠行為學(xué)、神經(jīng)元損傷的影響,并檢測(cè)凋亡自噬、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平,探討B(tài)oNT/A神經(jīng)保護(hù)作用的潛在機(jī)制。材料與方法:120只健康雄性SD大鼠,6-7周,220g-250g,隨機(jī)分為CON組(正常大鼠)、PILO組
6、(致癇大鼠)、PILO+NS組(致癇大鼠+鼻腔滴注生理鹽水)和PILO+BoNT/A組(致癇大鼠+鼻腔滴注BoNT/A),PILO組包括3h、8h、24h、72h亞組。PILO+NS、PILO+BoNT/A組大鼠腹腔麻醉后取仰臥位,給予鼻腔滴注等量生理鹽水或BoNT/A預(yù)處理,CON、PILO組同期僅給予腹腔麻醉處理,并記錄各組大鼠體重變化。給藥后第50天,四組大鼠給予腹腔注射氯化鋰(3mEq/kg),20小時(shí)后,CON組腹腔注射生理鹽水,余腹腔注射匹魯卡品(30mg/kg)。大鼠癲癇發(fā)作持續(xù)60min后,腹腔注射水合氯醛(0.3mg/kg)終止發(fā)作。根據(jù)Racine癇
7、性發(fā)作等級(jí)標(biāo)準(zhǔn),Ⅳ或V級(jí)發(fā)作判定為造模成功,記錄各組造模成功率及潛伏期。造模成功后PILO組3h、8h、24h亞組于癲癇發(fā)作終止后各時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦,分離海馬,采用Westernblot法檢測(cè)相應(yīng)蛋白濃度,72h亞組于發(fā)作終止72小時(shí)后麻醉、灌注取腦,制作石蠟切片,采用尼氏染色檢測(cè)海馬神經(jīng)元損傷。PILO+NS組、PILO+BoNT/A組于癲癇終止后24小時(shí)取海馬,采用Westernblot法檢測(cè)相應(yīng)蛋白濃度,剩余大鼠在SE后72小時(shí)麻醉后灌注取腦,制備石蠟及冰凍切片,觀察神經(jīng)元損傷、檢測(cè)cleaved-SNAP-25。結(jié)果:1.行為學(xué)觀察