ghrelin對(duì)匹羅卡品致癇大鼠海馬神經(jīng)元保護(hù)作用

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1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文Ghrelin對(duì)匹羅卡品致癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)研究生：徐婧婧導(dǎo)師t遲兆富教授中文摘要癲癇是一種嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，給社會(huì)、家庭和個(gè)人都帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。我國目前約有900萬癲癇患者，其中約25％為難治性癲癇。顳葉癲癇(temporallobeepilepsy,TLE)是最常見的難治性癲癇，其發(fā)病機(jī)制目前尚未完全清楚，藥物及手術(shù)治療均難以取得明顯的療效。氯化鋰．匹羅卡品致癇大鼠行為學(xué)、腦電圖和海馬神經(jīng)元損傷的病理學(xué)改變均與人類顳葉癲癇相似，因此是目前研究癲癇持續(xù)狀態(tài)(statu

2、sepilepticus，SE)和TLE的常用模型。癲癇發(fā)作能造成神經(jīng)元損傷己被廣泛認(rèn)可，但癲癇發(fā)作致神經(jīng)元損傷的分子機(jī)制目前仍不十分清楚。鑒于癲癇病因及發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性，探索新的神經(jīng)保護(hù)藥物及其潛在的作用機(jī)制是目前癲癇研究的熱點(diǎn)。Ghrelin是一種新發(fā)現(xiàn)的由28個(gè)氨基酸組成的腦．腸肽，主要由胃底粘膜分泌。它可以通過其功能性受體GHSR-la作用于垂體和下丘腦刺激生長(zhǎng)激素釋放、促進(jìn)食欲和增加體重。此外，大量的研究證實(shí)ghrelin在一些細(xì)胞中可以介導(dǎo)抗凋亡作用。近年來對(duì)ghrelin神經(jīng)保護(hù)作用的研究也日益深入，

3、如ghrelin可抑制缺氧低糖引起的下丘腦神經(jīng)元損傷，并且對(duì)腦缺血再灌注后的大鼠皮層和海馬神經(jīng)元具有保護(hù)作用。研究提示ghrelin可以通過激活P13K／Akt信號(hào)通路及抑制線粒體凋亡通路發(fā)揮抗凋亡作用。Ghrelin具有抗凋亡及神經(jīng)保護(hù)作用已被廣泛認(rèn)可，但其是否能在癲癇引起的海馬神經(jīng)元損傷中發(fā)揮保護(hù)作用目前研究還很少。為此，本課題建立氯化鋰．匹羅卡品致癇大鼠模型，探討癲癇發(fā)作后海馬神經(jīng)元損傷的病理學(xué)特征；檢測(cè)匹羅卡品致癇后及腹腔給予外源性ghrelin后大鼠海馬信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及線粒體凋亡山東大學(xué)博士學(xué)位論文通路相關(guān)

4、蛋白水平的變化，以此深入研究癲癇發(fā)病的分子生物學(xué)機(jī)制、探討ghrelin的抗癲癇作用及潛在的機(jī)制。本研究分三個(gè)部分：第一部分氯化鋰一匹羅卡品大鼠癲癇模型的建立及腦電圖、海馬神經(jīng)元損傷的病理學(xué)觀察目的觀察氯化鋰一匹羅卡品致癇大鼠行為學(xué)、電生理及海馬病理學(xué)改變，探討癲癇發(fā)作引起的海馬神經(jīng)元損傷。方法成年雄性Wistar大鼠腹腔注射氯化鋰．匹羅卡品誘發(fā)SE，觀察大鼠行為學(xué)變化。SE持續(xù)60min后腹腔注射地西泮終止發(fā)作。在致癇后2h對(duì)大鼠進(jìn)行腦電圖(EEG)描記，觀察大鼠腦電活動(dòng)的改變。癲癇發(fā)作后72h用多聚甲醛灌注取腦

5、，石蠟包埋切片，HE和Nissl染色觀察大鼠海馬神經(jīng)元的損傷。勿七甲皇口木1．氯化鋰．匹羅卡品誘發(fā)大鼠SE的成功率為93．3％(根據(jù)Racine發(fā)作評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到Ⅳ．V級(jí)發(fā)作的大鼠被認(rèn)為成功誘發(fā)SE，表現(xiàn)為雙側(cè)前肢陣攣、抽搐伴身體立起及全面性強(qiáng)直．陣攣發(fā)作，雙側(cè)后肢強(qiáng)直、身體背曲強(qiáng)直、跌倒)，急性期死亡率為6．7％。2．癲癇發(fā)作后2h(急性期)大鼠皮層和海馬區(qū)的EEG均表現(xiàn)為叢集性棘波放電。3．HE和Nissl染色顯示：正常大鼠海馬CAl和CA3區(qū)錐體細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰完整，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)正常，染色質(zhì)分布均勻，胞漿內(nèi)尼氏小體

6、豐富。癲癇發(fā)作后72h大鼠海馬CAl和CA3區(qū)部分神經(jīng)元脫失、細(xì)胞排列紊亂，胞質(zhì)濃縮，核固縮，胞漿內(nèi)尼氏小體減少。結(jié)論根據(jù)氯化鋰．匹羅卡品腹腔注射后大鼠行為學(xué)和EEG的改變說明氯化鋰．匹羅卡品可致大鼠急性癲癇發(fā)作(即SE)，氯化鋰．匹羅卡品致癇后可引起大鼠海馬神經(jīng)元損傷。2山東大學(xué)博士學(xué)位論文關(guān)鍵詞癲癇；癲癇持續(xù)狀態(tài)；匹羅卡品；海馬；神經(jīng)元損傷第二部分氯化鋰一匹羅卡品致癇大鼠海馬P13K／Akt信號(hào)通路以及凋亡相關(guān)蛋白水平的變化目的研究氯化鋰．匹羅卡品致癇后不同時(shí)程大鼠海馬P13K／Akt信號(hào)通路及線粒體凋亡相關(guān)蛋

7、白．Bax、Bcl．2和活性caspase．3水平的變化，進(jìn)一步探討癲癇后大鼠海馬神經(jīng)元損傷的分子生物學(xué)機(jī)制。方法成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、癲癇發(fā)作后2h、8h、16h、24h和72h組。在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦，分離海馬，提取蛋白，用Westernblot法檢測(cè)各組大鼠海馬磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(phosphorylatedphosphatidylinositol·3·kinase，phospho．P13Kp85)、磷酸化Akt(phospho-Ala)、Bax、Bcl．2和活性caspase．

8、3的水平。鈷甲=目7代1．大鼠海馬phospho—P13Kp85和phospho-Akt的水平在癲癇發(fā)作后2h和8h明顯的反應(yīng)性增高(p