無菌松材線蟲對10年生黑松致病性的研究

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1、第!"卷第#$期林業(yè)科學(xué)./01!"，*/1#$"$$%年#$月&’()*+(,&(-.,)&(*(’,)2345，"$$%!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!無菌松材線蟲對#$年生黑松致病性的研究#，"""池樹友韓正敏何月秋（#1寧波市森林病蟲防治檢疫站寧波6#7$#$；"1南京林業(yè)大學(xué)森林資源與環(huán)境學(xué)院南京"#$$68）摘要："$$#年9月，用無菌的松材線蟲對#$年生黑松進行接種。"$$"年:月，檢查黑松發(fā)病情況，并對接種

2、的松樹進行線蟲和細(xì)菌的再分離。試驗發(fā)現(xiàn)：接種的:株黑松##個月后仍有7株表現(xiàn)正常，沒有出現(xiàn)任何癥狀，而從其木質(zhì)部卻能分離到數(shù)量較多的無菌松材線蟲。結(jié)果說明：無菌的松材線蟲雖然能侵入松樹木質(zhì)部，但在不攜帶細(xì)菌的情況下對松樹是沒有致病力的。關(guān)鍵詞：無菌；松材線蟲；黑松；接種；致病性中圖分類號：&8%61##文獻標(biāo)識碼：,文章編號：#$$#;8!::（"$$%）#$;$$8#;$6!"#$%&’()"*&+,"*(-&)%.%"/(0123&,4’56$76,.8+%)&9)(.#6,"&$:%"*;’&<"%.+%)&=(

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6、菌在松材線蟲病中的致病作用以來，很多學(xué)者對松材線蟲病的真正致病原因進行了大量的試驗。曹越等（#99%）首先提出了松材線蟲不能產(chǎn)生致萎毒性物質(zhì)。隨后，趙博光等（"$$$）、談家金等（"$$#）、洪英娣等（"$$6）和@AB等（"$$6）進行了大量的接種試驗，證明了無菌松材線蟲對黑松（’/).%&?.)4$#3//）愈傷組織及無菌苗并沒有致病作用，只有當(dāng)無菌松材線蟲與致病細(xì)菌混合接種時，才能對愈傷組織及無菌苗產(chǎn)生致病力。據(jù)此，提出了松材線蟲病真正的病原是松材線蟲攜帶的致病細(xì)菌。雖然利用愈傷組織和尚未完全木質(zhì)化的松樹幼苗在一

7、定程度上可以反映松材線蟲的致病性，但在自然界松材線蟲病危害的均是完全木質(zhì)化的多年生大樹，所以要真正反映無菌松材線蟲的致病性，必須要在完全木質(zhì)化的大樹上進行檢驗。本次試驗在野外采用相對無菌的接種方法，測定了無菌松材線蟲對#$年生黑松的致病性。#材料與方法1B1松材線蟲的分離、無菌化處理與培養(yǎng)松材線蟲來源于南京市鐵心橋鎮(zhèn)自然感病死亡的#7W"$年生的馬尾松（’/).%9+%%")/+)+）。分離到的松材線蟲經(jīng)純化以后，先經(jīng)體積比為6X的@2處理7F=B，無菌水換洗6次，再用體積比為$1$7X的硫酸鏈""霉素和硫酸慶大霉素（

8、南京制藥廠）混合液處理7W%次，每次處理7F=B，不斷振蕩，避免線蟲沉入離心管底部，使抗菌素與線蟲充分混合。每次處理后均用無菌水換洗6次，處理后的線蟲經(jīng)*L培養(yǎng)基平板檢驗確系無菌后，在超凈工作臺上于解剖鏡下挑取雌、雄成蟲各#$條，放在黑松愈傷組織上，"7Y黑暗培養(yǎng)，后一直在黑松愈傷組織上繼代培養(yǎng)。接種時用無菌水將線蟲洗下，調(diào)節(jié)線蟲