蜂膠抗衰老機(jī)制探討2

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文蜂膠抗衰老機(jī)制探討姓名：王偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉福英;宋淑霞20040301中文摘要蜂膠抗衰老機(jī)制探討摘要目的：隨著年齡的增長(zhǎng)，老年機(jī)體患感染性疾病、

2、；{二『身免疫癇、腫瘤等疾病的機(jī)率明顯增加。因此降低老年機(jī)體忠病的機(jī)率，增強(qiáng)抵抗力，研究延緩衰老的方法對(duì)于積極地預(yù)防疾病、延長(zhǎng)壽命、提高生存質(zhì)量具有重要的意義。本實(shí)驗(yàn)分別用高齡小鼠和損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。高齡模型小鼠用蜂膠灌胃、體外培養(yǎng)的損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞加入適量蜂膠，以小鼠的NK細(xì)胞殺傷

3、活性、M中細(xì)胞吞噬功能、脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性、ILl和ILl2的活性、腦組織中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性作為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)；以損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞存活數(shù)和DNA的合成、以及LPS致血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的細(xì)胞間黏附分子一1(ICAM-I)作為體外實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)指標(biāo)，目的在于觀察蜂膠對(duì)老年機(jī)體免疫功能的影響和對(duì)損傷細(xì)胞的保護(hù)作用，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行研究和探討，為蜂膠產(chǎn)品的臨床應(yīng)用及其抗衰老的保健作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：實(shí)驗(yàn)分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)兩部分。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將高齡(20月齡)BAL

4、B／c小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只：高齡對(duì)照組(蒸餾水灌胃0．3ml／只)；低劑量實(shí)驗(yàn)組(蜂膠灌胃20mg／Kg體重)；中劑量實(shí)驗(yàn)組(蜂膠灌胃33mg／Kg體重)；高劑量實(shí)驗(yàn)組(蜂膠灌胃80mg／Kg體重)；7月齡BALB／c小鼠作為低齡對(duì)照組(蒸餾水灌胃中文摘要0．3ml／只)，每天一一次，連續(xù)4周后，用乳酸脫氫酶法分別測(cè)小鼠脾臟NK細(xì)胞活性、腹腔M中細(xì)胞吞噬活性，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率及蜂膠對(duì)經(jīng)過(guò)過(guò)氧化氫(H，O，)損傷后的脾細(xì)胞的淋巴細(xì)胞增殖活性。小鼠胸腺細(xì)胞增殖法測(cè)腹腔M中

5、細(xì)胞IL一1和脾臟淋巴細(xì)胞IL—2的活性，比色法測(cè)小鼠腦組織中MDA含量和SOD活性。體外實(shí)驗(yàn)：將血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)接種于96孔的細(xì)胞培養(yǎng)板，接種密度為1×104個(gè)／4L，每孔設(shè)3個(gè)復(fù)孔。分以卜二部分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。第一部分：蜂膠對(duì)H10，損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)的保護(hù)作用：實(shí)驗(yàn)分4組，每組8例：對(duì)照組(10％NCS的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng))；各濃度蜂膠組(蜂膠濃度分別為4×10一mg／ml、4×10～mg／ml、4×10。2mg／ml培養(yǎng)24小時(shí))：H，O，組(H，O，濃度為100tamol／L)：蜂膠

6、保護(hù)組(蜂膠濃度為4×10‘4mg／ml、4×10。=’mg／ml、4×10。’mg／ml培養(yǎng)24小時(shí)后用100umol／L的H，O，刺激4小時(shí))。MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞存活數(shù)量，BUdR滲入法檢測(cè)細(xì)胞DNA合成。第二部分：蜂膠對(duì)LPS致VEC表達(dá)ICAM．1的影響實(shí)驗(yàn)分4組，每組8例：對(duì)照組(10％NCS的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24d,H,t)；蜂膠組(蜂膠濃度為4×10‘3mg／ml培養(yǎng)24小時(shí))：各濃度LPS組(LPS濃度分別為1lag／ml、2ug／ml、3ug／ml、4ug／ml牙口5ug／ml的束

7、0激12／j、時(shí))；蜂膠+各濃度LPS組(加入濃度為4×10。mg／ml蜂膠培養(yǎng)24／j、時(shí)后，分另0以1ug／ml、2ug／rot、3Hg／ml、4ug／ml和5ug／ml的LPS刺激12小時(shí))。免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞問(wèn)中支摘要黏附分子．1(ICAM一1)的表達(dá)。結(jié)果：1．NK細(xì)胞殺靶試驗(yàn)比較用乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測(cè)定NK細(xì)胞活性。低齡對(duì)照組為52．03％±3．16％，高齡對(duì)照組為35．82％±11．23％，明顯低于低齡對(duì)照組(p<0．01)。低劑量組為43．84％±6．28％，中劑量組為50，74％±

8、2．01％，高劑量組為48．46％±0．19％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析三個(gè)劑量組NK細(xì)胞活性均高于高齡對(duì)照組，其中，中劑量組NK細(xì)胞活性明顯高于高齡對(duì)照組(p<0．01)，低、高劑量組與高齡對(duì)照組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0．05)。2，淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖活性。用刺激指數(shù)(S1)表示。低齡對(duì)照組為2．176±0．499，高齡對(duì)照組為1．287±0。186，高齡對(duì)照組淋巴細(xì)胞增殖活性明顯低于低齡對(duì)照紐(p<0．01)。低劑量組為2．193±0．157，中劑量組為1．72--4-_O．211，高劑

9、量組為2,207±0,416。三個(gè)劑量組SI均明顯高于高齡對(duì)照組(p<0。01)。3．蜂膠對(duì)牌臟淋巴細(xì)胞的氧化損傷的保護(hù)作用尉M耵、法檢測(cè)H，O，對(duì)脾臟淋巴細(xì)胞的氧化損傷后淋巴細(xì)胞增殖活性，怒SI(刺激指數(shù))表示。低齡、高齡對(duì)照組分剮為2．176±0．499、1．287±O．186，高齡對(duì)照組淋巴細(xì)胞增殖活性明顯低于低齡對(duì)照紐(p