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1、番茄黃化曲葉病毒檢疫鑒定方法《地方標準編制說明》一、工作簡況：1.1任務來源根據(jù)《陜西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局關(guān)于下達2015年第一批地方標準制修訂項目計劃的通知》(陜質(zhì)監(jiān)標[2015]8號文件），“番茄黃化曲葉病毒病檢測鑒定技術(shù)”（項目編號：SDBXM2-2015）于2015年5月5日正式下達編制任務。并依據(jù)陜西省技術(shù)監(jiān)督局文件開始編寫“番茄黃化曲葉病毒檢疫鑒定方法”。1.2協(xié)作單位本規(guī)范由陜西省動物研究所、陜西省生物農(nóng)業(yè)研究所和陜西省園藝蠶桑技術(shù)工作站共同起草完成。1.3主要工作過程2015年5月由陜西
2、省動物研究所向陜西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出申請的《番茄黃化曲葉病毒檢疫鑒定方法》獲得批準立項。6月份，開始了《番茄黃化曲葉病毒檢疫鑒定方法》的起草工作。（1）2015年7月，成立項目組，制訂編制計劃。（2）2015年7月至2015年12月，開始收集和整理國內(nèi)相關(guān)技術(shù)標準資料，對番茄黃化曲葉病毒病的毒源鑒定方法、病毒病分子生物學鑒定方法發(fā)展情況進行調(diào)研。（3）2016年1月至2016年6月，對標準初稿進行意見征詢和論證，經(jīng)項目組外7位省內(nèi)專家（見表1）仔細審閱，共提出了15條修改意見，通過進一步查閱資料和
3、討論，采納了其中的13條。對附錄C2.6部分，內(nèi)容為“如果PCR產(chǎn)物序列與番茄黃化曲葉病毒的序列同源，則可判定樣品為番茄黃化曲葉病毒陽性，若序列不同源，則可判定樣品為番茄黃化曲葉病毒陰性?！辈糠植杉{，理由參考同類標準，同源率也無具體的數(shù)值，不同物種同源率不同，修改為“如果PCR產(chǎn)物序列與番茄黃化曲葉病毒的序列同源性達到99%及以上，則可判定樣品為番茄黃化曲葉病毒陽性，未擴增到543bp的條帶，則判定為陰性。”對修改意見“附錄中所有表格因有表頭，并采用三線表”不予采納，理由是根據(jù)標準編寫原則，表格均為
4、實線，而非三線表。2016年7月項目組召開了編制人員參加的討論會，對標準初稿進行修改和完善。（5）2016年7月至2016年11月，根據(jù)征求意見情況，對《番茄黃化曲葉病毒檢疫鑒定方法》標準進行了完善修改，2016年11月完成了標準送審稿。表1“番茄黃化曲葉病毒檢疫鑒定方法”意見征詢專家名單序號姓名職稱從事專業(yè)工作單位1仵均祥教授昆蟲學西北農(nóng)林科技大學2劉俊生總農(nóng)藝師植物保護陜西省植保總站3張志斌研究員園藝中國農(nóng)業(yè)科學院蔬菜花卉研究所4吳云鋒教授植物病理學西北農(nóng)林科技大學5王剛云研究員植物保護商洛市植
5、保植檢站6楊兆森研究員植物保護渭南市植保植檢站7馮安榮高級農(nóng)藝師植物保護富平縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心1.4起草組成員及其所做的主要工作項目承擔單位陜西省動物研究所聯(lián)合陜西省園藝蠶桑技術(shù)工作站兩個起草單位及時成立標準制定小組，明確任務分工，制定編寫要求，統(tǒng)一思想，規(guī)劃工作思路，為標準制定建立了組織保障。標準制定成員有李英梅、楊苗苗、巨海林、劉晨等具體見表2。表2地方標準編寫小組成員序號姓名職稱工作單位備注1李英梅副研究員陜西省動物研究所負責人主編人2楊苗苗副研究員陜西學前師范學院編寫人3巨海林高級農(nóng)藝師陜西
6、省園藝蠶桑技術(shù)工作站編寫人4劉晨助理研究員陜西省動物研究所編寫人5張偉兵高級農(nóng)藝師陜西省園藝蠶桑技術(shù)工作站編寫人6洪波助理研究員陜西省動物研究所編寫人7張鋒副研究生陜西省動物研究所參與部分工作8王晨光高級農(nóng)藝師陜西省農(nóng)技推廣總站參與部分工作9陳志杰研究員陜西省動物研究所參與部分工作10張淑蓮研究員陜西省動物研究所參與部分工作二、標準編制原則和確定標準主要內(nèi)容1、標準編制原則（1）以符合國家及地方相關(guān)法律、法規(guī)的規(guī)定為原則；（2）以符合已經(jīng)頒布的國家及行業(yè)等相關(guān)標準為原則；（3）立足于簡單實用的番茄黃
7、化曲葉病毒病鑒定方法，為各級檢疫部門提供快速、簡易的鑒定方法，防止帶病毒番茄在無病區(qū)傳播為害。2、標準主要內(nèi)容按照國家標準和行業(yè)標準的格式，《番茄黃化曲葉病毒檢疫鑒定方法》內(nèi)容包括范圍、規(guī)范性引用文件、番茄黃化曲葉病毒基本信息、方法與原理、儀器設(shè)備用具及試劑、樣品制備、檢測方法、結(jié)果判定、樣品及資料保存、附錄共10部分。本項檢疫方法中所涉及的方法原理、儀器設(shè)備等均是在查閱國內(nèi)外文獻資料的基礎(chǔ)上，結(jié)合標準編寫小組成員多次實驗的基礎(chǔ)上首次編寫而成，主要創(chuàng)新點如下：（1）在方法原理部分，基于抗原抗體反應的
8、雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附DAS-ELISA或普通PCR、實時熒光RT-PCR，并根據(jù)生物學特性進行檢測鑒定。（2）在儀器設(shè)備部分，對所用到的儀器設(shè)備的規(guī)格、數(shù)量進行了具體規(guī)范，所用試劑均為分析純或生化試劑。在抽樣及樣品制備部分，規(guī)定了對種苗的取樣部位和取樣量。（3）在檢測方法部分詳細描述了酶聯(lián)免疫吸附測定、PCR檢測、實時熒光RT-PCR檢測、生物學測定的操作步驟。四、知識產(chǎn)權(quán)說明根據(jù)查新結(jié)果，由于番茄黃化曲葉病毒病不是中國源發(fā)的病害，屬外來入侵病害，國內(nèi)外尚未見同類標準
