番茄褪綠病毒與番茄黃化曲葉病毒復(fù)合侵染的分子鑒定

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1、2014（12）：15-20中國(guó)蔬菜CHINAVEGETABLES研究論文番茄褪綠病毒與番茄黃化曲葉病毒復(fù)合侵染的分子鑒定112331*趙黎明　李　剛　劉永光　國(guó)家進(jìn)　魏家鵬　竺曉平12（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東泰安271018；濰坊科技學(xué)院蔬菜花卉研究所，山東壽光262700；3山東省蔬菜工程中心，山東壽光262700）摘　要：2013年秋季，在山東壽光設(shè)施番茄植株上采集到葉片脈間褪綠黃化、葉片邊緣卷曲、葉片皺縮，后期葉片變厚、變脆，并伴隨著植株矮化的疑似番茄褪綠病毒和番茄黃化曲葉病毒復(fù)合侵染的樣本。

2、分別利用番茄褪綠病毒（Tomatochlorosisvirus，ToCV）外殼蛋白基因（CP）序列引物CP-F/CP-R和番茄黃化曲葉病毒（Tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV）特異引物TY1-R/TY1-F、TY2-R/TY2-F、TY3-R/TY3-F對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)、擴(kuò)增，分別得到774bp（GenBank登錄號(hào)KC709510）和2781bp（GenBank登錄號(hào)KJ546418）的核苷酸序列。經(jīng)序列測(cè)序后表明，KC709510與GenBank已登錄的番茄褪綠病毒ToCV-BJ（KC

3、311375）分離物相似性為99.6%，KJ546418與GenBank已登錄的番茄黃化曲葉病毒TYLCV-SDWF-L7（KC999850）分離物相似性為99.6%。關(guān)鍵詞：番茄褪綠病毒；番茄黃化曲葉病毒；RT-PCR檢測(cè)；復(fù)合侵染番茄每年因病毒病減產(chǎn)30%以上，夏、秋番間，導(dǎo)致的番茄減產(chǎn)在30%以上。目前，僅在北茄損失更為嚴(yán)重，有的年份或有的地塊幾乎絕收（馮京、山東及南京三地有ToCV的相關(guān)報(bào)道（Karwitha蘭香等，1987）。番茄褪綠病毒（Tomatochlorosisetal.，2013；Zhaoet

4、al.，2013；Zhaoetal.，2014）。virus，ToCV）屬于長(zhǎng)線形病毒科（Closteroviridae）而番茄黃化曲葉病毒（Tomatoyellowleafcurlvirus，毛形病毒屬（Crinivirus），于1998年在佛羅里達(dá)TYLCV）則屬于雙生病毒科（Geminiviridae）菜豆州首次報(bào)道，然后在法國(guó)、意大利、巴西、以色金色花葉病毒屬（Begomovirus），于2005年傳入我列等地相繼發(fā)現(xiàn)（Wisleretal.，1998；Accottoetal.，國(guó)（W

5、uetal.，2006），并由點(diǎn)到面快速傳播，是當(dāng)2001；Segevetal.，2004；Dalmonetal.，2005；Freitas前保護(hù)地番茄生產(chǎn)上首要病害。兩種病毒一個(gè)屬于etal.，2012）。該病毒病害于2010年前后在山東設(shè)RNA病毒（ToCV），一個(gè)屬于DNA病毒（TYLCV），施蔬菜產(chǎn)區(qū)即有發(fā)生，壽光當(dāng)?shù)夭宿r(nóng)稱之為“黃但都可以由煙粉虱傳播。頭”，由于其癥狀非常類似營(yíng)養(yǎng)缺失的褪綠黃化，綜上所述，明確我國(guó)保護(hù)地番茄是否遭受番最初被作為缺素癥對(duì)待，后經(jīng)分子鑒定該病毒病茄褪綠病毒與番

6、茄黃化曲葉病毒的復(fù)合侵染至關(guān)重害為番茄褪綠病毒病，2013年該病害在山東各地要，可為這兩種病毒的綜合防治提供預(yù)警。本試驗(yàn)保護(hù)地普遍發(fā)生和流行，病株率在20%～40%之對(duì)在山東壽光地區(qū)采集到的疑似兩種病毒復(fù)合侵染癥狀的番茄樣本開展了分子鑒定，以確定我國(guó)番茄趙黎明，女，碩士，專業(yè)方向：植物病理學(xué)，E-mail：708810891@qq.com植株上這兩種病毒的復(fù)合侵染，為今后兩種病毒病*通訊作者（Correspondingauthor）：竺曉平，男，教授，專業(yè)方向：植的致病機(jī)理研究和防治提供理論依據(jù)。物病理學(xué)，E-mail

7、：zhuxp@sdau.edu.cn收稿日期：2014-03-28；接受日期：2014-07-011　材料和方法基金項(xiàng)目：國(guó)家公益性（農(nóng)業(yè)）行業(yè)科研專項(xiàng)（201003065），山東1.1　材料省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（ZR2012CM032），山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2014GNC111008）1.1.1　待測(cè)番茄樣品　2013年秋，在山東壽光設(shè)施—15—《中國(guó)蔬菜》學(xué)術(shù)論文下載www.cnveg.org研究論文中國(guó)蔬菜CHINAVEGETABLES番茄種植區(qū)的大紅番茄、櫻桃番茄和粉果番茄植株列進(jìn)行比對(duì)。為便于鑒定分

8、析，將得到的陽(yáng)性樣品上，采集疑似復(fù)合感染番茄褪綠病毒和番茄黃化曲再利用外殼蛋白基因（CP）序列引物CP-F/CP-R葉病毒的病株樣本，保存在-80℃冰箱，用于DNA（Hirotaetal.，2010）反轉(zhuǎn)錄（體系同上）并進(jìn)行與RNA提取等后續(xù)試驗(yàn)；以健康的番茄植株葉片外殼蛋白全基因特異擴(kuò)增、克隆并