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《第4章 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè) ppt課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、第4章細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)及其耐藥表型檢測(cè)王輝北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部抗菌藥物敏感試驗(yàn)測(cè)定抗菌藥物在體外對(duì)病原微生物有無(wú)抑菌或殺菌作用的方法稱為抗菌藥物敏感性試驗(yàn)（AntimicrobialSusceptibilityTest），簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)（AST）。藥敏試驗(yàn)的意義預(yù)測(cè)抗菌治療的效果；指導(dǎo)抗菌藥物的臨床應(yīng)用；發(fā)現(xiàn)或提示細(xì)菌耐藥機(jī)制的存在，能幫助臨床醫(yī)生選擇合適的藥物，避免產(chǎn)生或加重細(xì)菌的耐藥；監(jiān)測(cè)細(xì)菌耐藥性，分析耐藥菌的變遷，掌握耐藥菌感染的流行病學(xué)，以控制和預(yù)防耐藥菌感染的發(fā)生和流行。藥敏試驗(yàn)MIC：在與微生物
2、生長(zhǎng)速率有關(guān)的特定時(shí)間間隔內(nèi)，通常是18～24小時(shí)，能夠抑制被測(cè)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度。對(duì)倍稀釋的優(yōu)點(diǎn)：操作容易敏感株的MIC呈正態(tài)分布區(qū)分異常(R)與敏感(S)的菌群藥敏試驗(yàn)折點(diǎn)的建立1.MIC的分布2.藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)定MIC的折點(diǎn)3.臨床療效和細(xì)菌清除率4.抑菌圈直徑的分布………定抑菌圈折點(diǎn)統(tǒng)計(jì)學(xué)的線性回歸計(jì)算錯(cuò)誤率：盡可能減少極重要誤差(假敏感率)MIC的分布藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)藥代動(dòng)力學(xué)：藥物吸收，分布，代謝，排泄藥效學(xué)：藥物對(duì)機(jī)體的作用時(shí)間依賴型（％T>MIC〕：β-內(nèi)酰胺類，大環(huán)內(nèi)酯類濃度
3、依賴型（AUC/MIC比率〕：AGS,FQ這些參數(shù)可用于計(jì)算具有最佳藥效的給藥方案MIC與抑菌圈直徑的線性關(guān)系耐藥中介敏感RISLog2.MICD1d2抑菌圈直徑（mm)v抑菌圈直徑與MIC的關(guān)系不同國(guó)家的判定折點(diǎn) －可能不同原因：用藥劑量不同，服藥的間隔不同評(píng)價(jià)敏感時(shí)較保守更強(qiáng)調(diào)檢測(cè)出耐藥株（即特定的耐藥群）技術(shù)因素：接種、培養(yǎng)基在我國(guó)主要遵循臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI）制定的抗菌藥物選擇原則。敏感性分類(CLSI
4、的定義)敏感（Susceptible）用常規(guī)用量治療有效常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到的平均血藥濃度超過(guò)細(xì)菌的MIC5倍以上。耐藥（Resistance）用常規(guī)用量治療不能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)MIC高于藥物在血、體液中可能達(dá)到的濃度敏感性分類（2）中介(Intermediate)MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反應(yīng)率低于敏感株藥物生理濃集部位有效(尿-FQ)加大用藥劑量可能有效緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結(jié)果的判定錯(cuò)誤藥敏試驗(yàn)的方法學(xué)半定量…紙片擴(kuò)散法(抑菌圈直徑)MIC法：稀釋法(肉湯、瓊脂)自動(dòng)化儀法抗生素連
5、續(xù)梯度法(Etest)流式細(xì)胞儀將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測(cè)試菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成無(wú)菌生長(zhǎng)的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。紙片擴(kuò)散法（Kirby-Bauer法）紙片擴(kuò)散法水解酪蛋白（MH）培養(yǎng)基，pH7.2～7.4，做成瓊脂厚度4mm，直徑90mm的平板；挑取孵育16～24小時(shí)已分純菌落，置于生理鹽水管中
6、，振蕩混勻后校正濃度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。紙片擴(kuò)散法用無(wú)菌棉拭子蘸取菌液，在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液；然后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60度；最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周；平板在室溫下干燥3～5min，用無(wú)菌鑷子或商品化的紙片分配器將含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心距離應(yīng)大于24mm，紙片距平板內(nèi)緣大于15mm。紙片擴(kuò)散法35℃孵育16～24小時(shí)量取抑菌圈直徑；根據(jù)抑菌環(huán)的直徑，按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)判讀，報(bào)告敏感、中介、耐藥。2021/7/1018紙片擴(kuò)散法－影響因素MIC接種菌量細(xì)菌生長(zhǎng)率抗生素
7、含量、擴(kuò)散性平皿厚度溫度，預(yù)孵育時(shí)間2021/7/1019紙片擴(kuò)散法－標(biāo)準(zhǔn)化CLSI：美國(guó)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute)每年修訂更改包括質(zhì)控新藥的判定標(biāo)準(zhǔn)特殊耐藥性的檢測(cè)2021/7/1020CLSI的法規(guī)規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控；規(guī)定常規(guī)測(cè)試報(bào)告的抗生素；不同的藥判定標(biāo)準(zhǔn)不同；不同的菌判定標(biāo)準(zhǔn)也不同。2021/7/1021常規(guī)測(cè)試并報(bào)告的藥物分組(1)腸桿菌科綠膿和非腸桿菌科一級(jí)氨芐西林頭孢他啶，慶
8、大霉素頭孢唑林，慶大霉素替卡西林，哌拉西林二級(jí)阿米卡星阿米卡星氨芐西林/舒巴坦頭孢吡肟，頭孢哌酮阿莫西林/克拉維酸氨曲南頭孢呋肟，頭霉素環(huán)丙沙星，亞胺培南頭孢噻肟，頭孢曲松替卡西林/克拉維酸環(huán)丙沙星，亞胺培南妥布霉素，復(fù)方磺胺替卡西林，哌拉西林三級(jí)氨曲南，頭孢他啶頭孢曲松卡那霉素，奈替米星氯霉素，奈替米星妥布霉素四環(huán)素，氯霉素2021/7/1022常規(guī)測(cè)試并報(bào)告的藥物分組(2)葡萄球菌腸球菌一級(jí)苯唑西林，青霉素青霉素，氨芐西林二級(jí)紅霉素類萬(wàn)古霉素克林霉素
