細菌藥敏試驗及耐藥機制的研究

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1、細菌藥敏試驗及耐藥機制研究進展安徽省細菌耐藥監(jiān)控中心安徽醫(yī)科大學臨床檢驗診斷學教研室安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科徐元宏一、藥敏試驗種類1、紙片擴散法2、稀釋法稀釋法包括宏量肉湯稀釋法(macrodilutiontest)、微量肉湯稀釋法(microdilutiontest)、瓊脂稀釋法(agardilutiontest)。3、E-test法細菌藥敏試驗-宏量稀釋法Minimalinhibitoryconcentration(MIC)Referencemethod.Addstandardinoculumt

2、odilutionsofantibiotic.Incubateovernight.MICislowestconcentrationthatinhibitsgrowth(canalsobeperformedbyagardilution).Interpretation(SorR)isbasedonachievabledruglevels104cfu4210.50.250.120mg/ml微量液體稀釋法細菌藥敏試驗-E-test法E-testStripscontainingagradientofantibiot

3、icareplacedonlawnofbacteriaandincubatedovernight.MICisdeterminedatpointwherezoneofinhibitionintersectsscaleonstrip.CombineseaseofKBwithanMICmethod.ParticularlyusefulforS.pneumoniae.二、藥敏試驗基本條件（1）對于從糞便中分離的沙門菌和志賀菌屬，常規(guī)僅測試和報告氨芐西林，一種喹酮類藥和甲氧芐啶/磺胺甲噁唑。此外對于胃腸外分離的沙門

4、菌屬還一定要測試并報告氯霉素及其某一種Ⅲ代頭孢菌素的結果。（2）所有確認產(chǎn)ESBLs的菌株應當報告為耐所有青霉素類，頭孢菌素類和氨曲南。（3）出于對流行性，治療及感染控制方面的考慮，應該把從尿中分離的所有菌株做ESBLs篩選試驗作為一個基本制度。（4）僅當被認為與臨床有關時（如菌血癥）才進行奇異變形桿菌ESBLs篩選試驗（5）腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬和沙雷菌屬可發(fā)展為耐藥。最初分離的敏感菌株在開始治療3~4天內可變?yōu)槟退?，因此對重復分離菌株應重新進行藥敏試驗。。用紙片擴散法能可靠地測定分離于囊性纖維化病人的

5、銅綠假單菌的敏感性，但在作為敏感結果報告前，應將孵育時間延長至24小時。（1）對于腸球菌屬，頭孢菌素，氨基糖苷類（篩選高水平耐藥除外），克林霉素和甲氧芐啶-磺胺甲噁唑可以在體外顯示活性但臨床上無效，因此這些菌株不應該報告為敏感。（2）腸球菌心內膜炎要求大劑量青霉素或氨芐西林，或萬古霉素或替考拉寧聯(lián)合慶大霉素或鏈霉素以增加殺菌作用。（3）慶大霉素和鏈霉素篩選試驗，能夠預測氨芐西林、青霉素或萬古霉素與一種氨基糖苷類抗生素之間的協(xié)同效應。其它的氨基糖苷類不需進行測試，因為它們對腸球菌的活性并不優(yōu)于慶大霉素和鏈霉

6、素。（4）對血和腦脊液分離株推薦用頭孢硝噻吩β-內酰胺酶試驗。β-內酰胺酶試驗陽性提示青霉素耐藥，同時也對酰胺基，羧基和脲基青霉素耐藥。（1）肺炎鏈球菌對苯唑西林的抑菌環(huán)≥20mm的菌株對青霉素敏感(MIC≤0.06μg/ml)（2）苯唑西林的抑菌環(huán)≤19mm的菌株應當測定青霉素、美洛培南和頭孢噻肟或頭孢曲松的MICs三、耐藥表型的檢驗1、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、大腸埃希菌和奇異變形桿菌中ESBLs檢測的篩選與確證試驗紙片法：初篩和確證液體稀釋法：初篩和確證3.D試驗-克林霉素誘導耐藥試驗（1）機制：

7、對大環(huán)內酯耐藥的葡萄球菌可能有天然或誘導性對克林霉素的耐藥[通過erm基因編碼的23SrRNA甲基化也稱為MLSB（大環(huán)內酯、林可和B型鏈陽霉素）耐藥]，或只對大環(huán)內酯類耐藥（由msrA基因編碼的外排機制）。（2）方法：MHA或血平板，紙片相鄰試驗，對于葡萄球菌，距紅霉素紙片（15μg/片）邊緣15~26mm處放置克林霉素紙片(2μg/片)來進行檢測；對于β-溶血鏈球菌，將克林霉素紙片(2μg/片)和紅霉素紙片（15μg/片）貼在相鄰的位置，紙片邊緣相距12mm。（3）結果判讀：35℃空氣，16-20小時

8、孵育后，克林霉素抑菌環(huán)不出現(xiàn)“截平”現(xiàn)象，應報告分離株對其敏感。鄰近紅霉素紙片側克林霉素抑菌環(huán)出現(xiàn)“截平”現(xiàn)象（稱為“D”抑菌環(huán)），提示存在可誘導的克林霉素耐藥，應報告分離株對其耐藥，在報告中應注明“通過誘導克林霉素耐藥試驗，推測此菌株對克林霉素耐藥，克林霉素對某些病人可能仍有效”；若無“截平”現(xiàn)象，則應報告菌株對克林霉素敏感。葡萄球菌對大環(huán)內酯類抗生素耐藥機制研究：一、由msrA基因介導的主動外排機制，即M型耐藥；二、抗生素