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1、第25章病毒感染的檢查方法和防治原則ExaminationandStrategyofPreventionandTherapyforViralInfection第一節(jié)病毒感染的檢查方法一、標(biāo)本的采集和送檢用于分離病毒或檢測(cè)其核酸的標(biāo)本，應(yīng)采集急性期標(biāo)本，要根據(jù)感染部位采集標(biāo)本，應(yīng)嚴(yán)格注意無(wú)菌操作。由于病毒在室溫中很易被滅活，應(yīng)在采集和運(yùn)送標(biāo)本中注意冷藏。Theprincipleforthecollectionofspecimenforviraldiagnosisissameasthatforbacteriainadditiontothefollowing.1.Addingantib
2、ioticsintothespecimen.2.Theviralspecimenstoredintothelowtemperatureorice-bagandtransportedtothelabASAP.Storedatthe-70oCorliquidnitrogeninlab.3.Thepathologicaltissuestoredinthe50%neutralglycerol4.Theserumtakenatonsetofillnessand2-3weeksafterrecovertocomparethetitreofantibodies.二、病毒分離培養(yǎng)的方法1.動(dòng)物a
3、nimals接種：如鼠、兔、犬、牛和猴等。2.雞胚chickenembryo接種：針對(duì)有些病毒，如流感病毒、痘病毒。3.細(xì)胞cellculture培養(yǎng)：有三種類型的細(xì)胞。IsolationandidentificationofvirusesinthelabisGoldstandardfordiagnosis.（1）細(xì)胞類型①原代細(xì)胞Primarycellculture：對(duì)多種病毒的易感性高，主要用于從標(biāo)本中分離病毒。②傳代細(xì)胞Continuouspassagecellline：是指可在體外連續(xù)傳代的細(xì)胞。大多數(shù)來(lái)自腫瘤組織或二倍體細(xì)胞，如Hela細(xì)胞或自發(fā)轉(zhuǎn)化的原代細(xì)胞系，如中國(guó)
4、地鼠卵巢細(xì)胞（CHO）。這些細(xì)胞系的染色體與正常細(xì)胞不同，為多倍體。③二倍體細(xì)胞Diploidcellline：則為在體外連續(xù)傳代50～100代后，仍保持其二倍染色體數(shù)目的細(xì)胞。（2）病毒增殖指標(biāo)①細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）：溶細(xì)胞型病毒感染細(xì)胞后，可出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)縮、裂解或細(xì)胞腫大、數(shù)個(gè)細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞或細(xì)胞聚集成葡萄串狀、脫落或死亡等。未接種病毒的細(xì)胞CPE的細(xì)胞（Hela細(xì)胞，柯薩奇病毒感染）②血吸現(xiàn)象：感染細(xì)胞膜上帶有病毒（正黏病毒，副黏病毒）血凝素與加入的紅細(xì)胞結(jié)合。③干擾現(xiàn)象：當(dāng)兩種病毒感染同一種細(xì)胞時(shí)，常發(fā)生一種病毒抑制另一種病毒復(fù)制增
5、殖的現(xiàn)象。(三)病毒的鑒定病毒的形態(tài)學(xué)鑒定：電子顯微鏡、光學(xué)顯微鏡病毒血清學(xué)鑒定病毒成分鑒定（4）病毒定量方法空斑形成單位（plaqueformingunit,PFU）：測(cè)定病毒數(shù)量可用空斑形成單位。一個(gè)空斑是標(biāo)本中一個(gè)病毒大量復(fù)制所致，有感染性的病毒經(jīng)適當(dāng)稀釋后接種于單層細(xì)胞，由于單個(gè)病毒的復(fù)制增殖使局部單層細(xì)胞脫落，此即空斑。50％組織細(xì)胞感染量（TCID50）紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)光鏡、電鏡分離培養(yǎng)免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)SouthernblotPCRNorthernblot病毒感染的檢測(cè)方法三、病毒感染的血清學(xué)診斷采用免疫標(biāo)記技術(shù)，即用熒光素、同位素、生物素和酶等標(biāo)記已知
6、的特異性抗體，用于檢測(cè)病毒感染局部脫落細(xì)胞或分泌物細(xì)胞中的抗原，來(lái)早期診斷病原。機(jī)體血清中出現(xiàn)抗某種病毒的抗體，除患過(guò)相應(yīng)的疾病外，亦可因隱性感染或疫苗接種而產(chǎn)生。因此，抗體效價(jià)必須明顯高于正常人群的水平或隨病程遞增才有診斷價(jià)值。用已知的病毒與血清中未知的抗體進(jìn)行反應(yīng)。Theknownantigenofvirususedforthedetectionofunknownantibodyintheserum.1.neutralizingtest:NTtest2.complementfixationtest,CFtest:3.hemoagglutinationinhibitiontes
7、t:4.agarimmuno-diffusiontest:新病毒的鑒定identificationofnewlyviruses:1.typesofviralnucleicacid:DNaseandRNaseusedforconfirmofDNAorRNA.2.Detectionofphysic-chemicalproperties3.morphologicalobservation:4.serologicaldiagnosis5.genesequenceandmatch.第二節(jié)病
