雞胚接種技術(shù)醫(yī)學(xué)

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1、雞胚接種技術(shù)雞胚接種技術(shù)——概況雞胚接種的優(yōu)點(diǎn)：是個(gè)有機(jī)體，有神經(jīng)和血管分布及臟器構(gòu)造，為病毒生長(zhǎng)提供豐富營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和合適的環(huán)境。組織分化程度較低，對(duì)大多數(shù)病毒較敏感，病毒繁殖量高。很少攜帶病毒或細(xì)菌，對(duì)接種的病毒不產(chǎn)生抗體。來(lái)源充足、經(jīng)濟(jì)，操作簡(jiǎn)便。雞胚接種技術(shù)——概況雞胚接種的缺點(diǎn)：病毒通常不使雞胚產(chǎn)生特異性的感染指征，必須利用另外的實(shí)驗(yàn)來(lái)證明病毒的存在。被母雞食入的抗生素會(huì)傳遞給雞胚，使接種病毒繁殖受到抑制。雞胚本身可能攜帶病毒，影響病毒接種及實(shí)驗(yàn)結(jié)果操作不當(dāng)污染，導(dǎo)致雞胚死亡雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Day0雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Day1

2、雞胚外觀無(wú)明顯變化在卵黃上可見(jiàn)到橢圓形的胎盾，是未來(lái)的胚區(qū)心臟、血管、消化道、脊柱、神經(jīng)系統(tǒng)、頭、眼開(kāi)始形成。雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Day2卵黃囊、羊膜、絨毛膜開(kāi)始形成。胚盤(pán)被紅色血管圍成櫻桃形或橢圓形。胚胎中可見(jiàn)一搏動(dòng)的原始心臟。雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Day3鼻、腿、翅開(kāi)始形成，器官出現(xiàn)。尿囊開(kāi)始長(zhǎng)出，胚胎的位置與蛋的長(zhǎng)軸垂直。胚胎與延伸的卵黃囊血管形似蚊子。雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Day4尿囊和羊膜腔形成。卵黃體積繼續(xù)增大，卵黃囊血管包圍卵黃近1/3。胚胎與卵黃囊血管形似蜘蛛。雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚

3、的發(fā)育過(guò)程：Day5生殖腺已性分化，胚胎出現(xiàn)了兩性的區(qū)別。面部和鼻部開(kāi)始有了雛形。胚胎彎曲成“C”形。眼的黑色素大量沉積，照蛋可明顯看到黑色的眼睛雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Day6胚體已初具翼和腿的外形，眼睛黑色素更多。尿囊增長(zhǎng)迅速，尿囊血管系統(tǒng)迅速發(fā)育，已經(jīng)覆蓋羊膜與部分卵黃。卵黃囊血管分布在卵黃面積達(dá)2/3以上?？梢?jiàn)頭部和軀干部?jī)蓚€(gè)小圓團(tuán)。雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Day7卵黃體積達(dá)到最大程度，胎兒的外形已具備禽類的特點(diǎn)。頭和眼所占的比例相當(dāng)大，前后肢分化明顯。照蛋時(shí)胚胎在羊水中不容易看清楚。雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚的發(fā)育過(guò)程：Da

4、y8~11891011雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理約10日齡雞胚的結(jié)構(gòu)示意圖雞胚接種技術(shù)——雞胚的結(jié)構(gòu)與生理卵殼與殼膜卵殼位于最外層的石灰質(zhì)硬殼，上有細(xì)孔，進(jìn)行氣體交換。殼膜位于卵殼的下層，能使氣體和液體分子交換。培養(yǎng)雞胚時(shí)需要控制一定的濕度和氣流。氣室呼吸和調(diào)節(jié)壓力絨毛尿囊膜位于殼膜之下，起胚胎呼吸器官的功能，氧氣的交換是在絨毛尿囊膜的血管內(nèi)通過(guò)卵殼孔進(jìn)行。雞胚接種技術(shù)——雞胚的孵育和檢查羊膜與羊膜腔羊膜為胚胎最內(nèi)層包被；羊膜腔內(nèi)有羊水，胚胎浸泡于其中。尿囊腔位于絨毛尿囊膜與羊膜之間，為胚胎的排泄器官。卵黃囊主要營(yíng)養(yǎng)的存儲(chǔ)場(chǎng)所，在胚胎發(fā)育早期供給雞胚營(yíng)養(yǎng)卵白在胚胎發(fā)育晚期供給雞胚營(yíng)養(yǎng)雞

5、胚接種技術(shù)——雞胚的孵育和檢查受精雞卵的選擇接種病毒的受精雞卵應(yīng)未感染已知病毒或其它微生物，最好來(lái)自無(wú)特定病原體(SpecifiedPathogenFree,SPF)雞群。受精卵的殼最好是白色的，利于檢卵燈觀察雞胚的發(fā)育情況。受精卵必須新鮮，保存在5~20℃不超過(guò)10天。雞胚接種技術(shù)——雞胚的孵育和檢查雞胚的孵育孵育溫度為38~39℃孵育濕度為40~70%翻卵：防止蛋白與殼膜粘連，促進(jìn)羊膜運(yùn)動(dòng)和空氣流通。每天180°轉(zhuǎn)動(dòng)雞胚1~2次。通風(fēng)：為了排出CO2和吸入O2。雞胚接種技術(shù)——雞胚的孵育和檢查檢卵：在胚胎發(fā)育的早期，不易辨認(rèn)。孵育4~5日后即可于檢卵燈上檢測(cè)雞胚受精與否及發(fā)育情況未受精卵

6、：只見(jiàn)模糊的卵黃陰影，不見(jiàn)血管和雞胚痕跡?；钆咛ィ壕哂星逦难芎碗u胚暗影，較大的雞胚還可見(jiàn)到胎動(dòng)。但孵育14~15天以后胎動(dòng)不明顯或無(wú)胎動(dòng)。死胎：血管昏暗模糊，沒(méi)有胎動(dòng)。雞胚接種技術(shù)——雞胚的接種途徑和方法雞胚的接種途徑：羊膜囊接種絨毛尿嚢膜接種尿嚢腔接種卵黃嚢接種雞胚接種技術(shù)——雞胚的接種途徑和方法根據(jù)病毒種類選擇適宜的接種部位：羊膜囊和尿囊腔同時(shí)接種法：流感病毒絨毛尿囊膜接種法：牛痘、天花、單純皰疹病毒卵黃囊接種法：蟲(chóng)媒病毒（如登革熱病毒、黃熱病病毒）雞胚接種技術(shù)——雞胚的接種途徑和方法羊膜囊接種：主要應(yīng)用于臨床材料中分離流感病毒。接種到羊膜囊中的病毒可遍及胚胎各種組織和細(xì)胞，使具有特

7、定細(xì)胞親嗜性的病毒被充分利用，從而提高病毒繁殖的可能性。病毒也可被排泄到尿囊腔，使尿囊液中含有大量病毒。分離病毒時(shí)，可同時(shí)收獲羊水和尿囊液雞胚接種技術(shù)——雞胚的接種途徑和方法絨毛尿囊膜接種：主要用于分離和繁殖在絨毛尿囊膜上產(chǎn)生斑點(diǎn)狀和痘皰狀的病毒，如牛痘、天花、單純皰疹和鳥(niǎo)痘病毒?？稍诮q毛尿囊膜上滴定這些病毒，通過(guò)產(chǎn)生斑和痘的數(shù)目來(lái)計(jì)算感染性病毒顆粒的數(shù)目。還可用于抗體滴定，因?yàn)榘吆投粩?shù)目減少的程度與抗體濃度