雞胚接種方法.ppt

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1、雞胚接種技術(shù)方法應(yīng)用價(jià)值存在問題動(dòng)物接種應(yīng)用最早；方法簡便；結(jié)果易于觀察自身帶病毒；有的接種后不敏感；動(dòng)物飼養(yǎng)問題雞胚培養(yǎng)來源客觀，易于管理，帶病毒機(jī)會(huì)少；多途徑接種敏感病毒譜窄細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用廣泛，敏感病毒譜廣設(shè)備技術(shù)要求條件高病毒分離培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)：1.它的組織分化程度低，可選擇適當(dāng)途徑接種，病毒易復(fù)制，感染病毒的膜和液體含大量病毒。2.是個(gè)整體，有神經(jīng)血管的分布及臟器的構(gòu)造。3.來源充足，操作簡單，通常是無菌的，對接種的病毒不產(chǎn)生抗體。雞胚培養(yǎng)法的缺點(diǎn)：1.一般的病毒通常不使雞胚產(chǎn)生特異性的感染指征。2.卵黃中常常含有抗家禽病原體的母體抗體

2、。3.某些細(xì)菌、衣原體和病毒能夠從感染的母雞傳遞到雞胚。4.通常雞胚常常含有白血病病毒。5.在雞食物中加入抗菌素，母雞吃后會(huì)傳遞給雞胚，雞胚就會(huì)產(chǎn)生對立克次體和衣原體感染的抵抗。二、雞胚的結(jié)構(gòu)與生理雞胚是由三個(gè)胚層發(fā)育起來的，即外胚層，中胚層和內(nèi)胚層，它們構(gòu)成胚胎的組織與器官。（約10日齡雞胚的結(jié)構(gòu)見圖）氣　室雞　胚卵黃囊尿囊腔羊膜腔絨毛尿囊膜卵　白卵膜雞胚的管理（一）雞胚的選擇首選健康萊亨雞受精卵，其殼潔白易于觀察胚胎，其他受精卵也可使用。接種病毒的受精雞卵應(yīng)未感染已知病毒或其它微生物（如新城疫病毒或支原體等），最好來自無特定病原體（specif

3、ied-pathogensfree，SPF）雞群，接種立克次體的受精雞卵應(yīng)來自未食用高濃度抗生素的雞群。雞胚的孵育受精雞卵孵育時(shí)不要擦洗，以免受細(xì)菌污染。最好用能自動(dòng)調(diào)節(jié)溫度、濕度、氣流及翻卵的孵卵箱孵育。如沒有，也可用普通恒溫箱，但要在溫箱中放一盛滿水的方盤，以保持適當(dāng)?shù)臐穸取７跤龖?yīng)在37℃－39℃、40%―70%的相對濕度下進(jìn)行。濕度太高會(huì)使氣室發(fā)育過度，而濕度過低又會(huì)導(dǎo)致氣室發(fā)育不良，甚至造成雞胚死亡。通氣也很重要，如果空氣不流通，也可造成雞胚死亡。為了避免胚胎膜粘連和胚胎發(fā)育不均勻，應(yīng)每隔一段時(shí)間轉(zhuǎn)動(dòng)一次受精雞卵。檢卵在發(fā)育的早期，雞胚不易

4、辨認(rèn)，要到4－5天后才容易看見。因此，檢卵要在孵育4－5天后進(jìn)行?；畹碾u胚絨毛尿囊膜界線較明顯，上面的血管清晰可見、成網(wǎng)狀，可看到明顯的胚胎自主運(yùn)動(dòng)。如果胚胎活動(dòng)呆滯或不能自主運(yùn)動(dòng)，血管模糊、變細(xì)、折斷脫落，絨毛尿囊膜界線模糊，說明雞胚已瀕臨死亡或已經(jīng)死亡。接種前后都要檢卵。接種前檢卵是要了解雞胚的存活情況，標(biāo)記氣室邊界和胚胎位置；接種后檢卵是為了觀察接種后胚胎的狀況。發(fā)育正常胚與異常胚的辯別1、正常胚頭照可見眼點(diǎn)明顯，血管色鮮紅，呈放射狀；二照可見整個(gè)蛋除氣室外均布滿鮮紅血管（合攏）三照時(shí)蛋的小頭看不到發(fā)亮部分（封門），氣室界線邊緣血管鮮紅。2、

5、弱胚蛋頭照胚體小，呈低階段纖細(xì)血管，眼點(diǎn)不明顯；二照可見小頭有0.5cm2以上區(qū)域無血管分布；三照時(shí)小頭發(fā)亮，氣室界線邊緣的血管面較大。3、死胚蛋頭照可見血點(diǎn)、血線或血環(huán)緊貼內(nèi)殼面，血管色因氧化而比活胚深，有時(shí)散黃或有灰白色凝塊；中期死胚特征是氣室界線模糊，胚胎呈黑團(tuán)狀，常與殼粘連，不動(dòng)，當(dāng)手搖胚蛋時(shí)，胚胎隨之轉(zhuǎn)動(dòng)，停止搖晃時(shí)也隨之停止。而活胚時(shí)刻在活動(dòng)；三照死胚的小頭發(fā)亮，血管色深，氣室界線模糊，蛋體發(fā)涼；對尚未出殼的也可用溫水來判斷將蛋放入40°C溫水中，凡是在水中輕微晃動(dòng)的為活胚，反之則為死胚。三、材料（一）受精雞卵（二）孵卵箱或恒溫箱（三）

6、撿卵燈，照卵燈（四）砂輪、三棱針（五）卵盤、卵杯（六）其它：1ml注射器，針頭，2.5%碘酒，75%酒精，鑷子，無菌生理鹽水，毛細(xì)吸管，橡膠吸頭，液體石蠟，蠟和膠布等。四、接種技術(shù)（一）活胚檢查1.血管：活胚可見清晰的血管，有時(shí)可見血管搏動(dòng)，死胚血管模糊成淤血帶或淤血塊。2.胎動(dòng)：活胚可見明顯的自然運(yùn)動(dòng)，尤其在轉(zhuǎn)動(dòng)胚胎時(shí)，死胚見不到任何胎動(dòng)，胚胎發(fā)紅像出血樣，有的呈現(xiàn)黑塊。3.血管網(wǎng)是否豐滿：發(fā)育好的雞胚可見密布豐滿的血管網(wǎng)，也就是絨毛尿囊膜，死胚則見不到這一現(xiàn)象。第一天胚盤直徑0.7cm，胚重0.2mg，在胚盤明區(qū)形成原條，其前方為原結(jié)，原結(jié)前端

7、為頭突，頭突發(fā)育形成脊索神經(jīng)管，中胚層的細(xì)胞沿著經(jīng)管兩側(cè)，形成左右對稱的呈方形薄片的體節(jié)4-5對，中胚層進(jìn)入暗區(qū)在胚部的邊緣出現(xiàn)許多紅點(diǎn)，俗稱血島；第二天胚盤直徑1.0cm，胚重3mg，卵黃囊羊膜絨毛膜開始形成，胚胎頭部開始從胚盤分離出來，血島合并形成血管，入孵25小時(shí)心臟開始形成，30-42小時(shí)后心臟開始跳運(yùn)，可見到20-27對體節(jié)，照蛋時(shí)可見卵黃囊血管區(qū)，形似櫻桃，俗稱櫻桃珠第三天胚長0.55cm，胚重20mg，尿囊開始長出，胚的位置與蛋的長軸垂直，開始形成前后肢芽，出現(xiàn)5個(gè)腦胞的原基，眼的色素開始沉著，有35對體節(jié)，照蛋時(shí)，可見胚和伸展的卵黃

8、囊血管形似蚊子，俗稱“蚊蟲珠”；第4天胚長0.77cm，胚重50mg，孵黃囊血管包圍蛋黃達(dá)1/3，肉眼明顯看到尿囊，羊膜腔