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1、實(shí)驗(yàn)一雞胚接種病毒培養(yǎng)的宿主系統(tǒng)：本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、雞胚體外培養(yǎng)的器官、組織細(xì)胞一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怆u胚的基本結(jié)構(gòu)與功能，掌握常用的雞胚接種方法。二、原理雞胚為活的動(dòng)物機(jī)體，組織分化程度低，病毒易于增殖，可選擇不同的日齡和接種途徑，感染病毒的組織和液體中含大量病毒。二、材料雞胚10日齡病毒雞新城疫病毒（NDV）照蛋燈打孔器石蠟注射器蛋座酒精棉球、碘酊棉球三、雞胚的結(jié)構(gòu)與功能卵殼上有細(xì)孔，進(jìn)行氣體交換殼膜使氣體分子和液體分子在內(nèi)外兩方面進(jìn)行交換。氣室呼吸和調(diào)節(jié)壓力絨毛尿囊膜起胚胎呼吸器官的功能，氧氣的交換是在膜的血管內(nèi)
2、通過(guò)卵殼孔而進(jìn)行的。尿囊腔胚胎的排泄器官，內(nèi)含有尿囊液，初為透明液體，是單純生理鹽溶液，以后尿囊液中尿酸鹽迅速增加，胚胎發(fā)育到第12-13天后，尿囊液開(kāi)始變得混濁。6、羊膜與羊膜腔其中盛有羊水，胎體浸泡于其中卵黃在胚胎發(fā)育早期供給雞胚營(yíng)養(yǎng)。卵白在胚胎發(fā)育晚期供給雞胚營(yíng)養(yǎng)。四、受精卵的選擇最好是來(lái)自SPF雞群，以降低母源抗體的影響受精卵的殼最好是白色的受精卵必須新鮮，保存在5-20℃不要超過(guò)10天，保存一個(gè)月的受精卵，孵化率將近于零。五、孵育孵卵箱內(nèi)的溫度應(yīng)保持在37.5-38.5℃相對(duì)濕度：50%-60%必須保證具有充分的新鮮空氣流通，特
3、別是在孵化5-6天以后。從孵育后第3天開(kāi)始，每天翻卵一次。自孵育后的第4天開(kāi)始檢卵，每天一次。孵育4-5日后即可于檢卵燈上檢查雞胚受精與否及發(fā)育情況。未受精卵：只見(jiàn)模糊的卵黃陰影，不見(jiàn)血管和雞胚痕跡?；钆撸壕哂星逦难芎碗u胚暗影，較大雞胚還可見(jiàn)到胚動(dòng)，但孵育14、15天以后胎動(dòng)不明顯，甚至無(wú)胎動(dòng)。死胚：血管昏暗模糊，沒(méi)有胚動(dòng)。六、檢卵七、接種前處理用檢卵燈再次檢查雞胚活力，用鉛筆畫(huà)出氣室和胚胎的位置，并在將要接種的部位做好記號(hào)。對(duì)雞胚進(jìn)行消毒八、接種途徑絨毛尿囊膜接種尿囊腔接種卵黃囊接種靜脈接種藍(lán)舌病毒羊膜腔接種正粘病毒和副粘病毒腦內(nèi)接
4、種狂犬病毒眼球接種（一）卵黃囊接種法主要用于蟲(chóng)媒披膜病毒以及鸚鵡熱衣原體和立克次氏體等的分離和增殖。方法一：取6-8日齡雞胚，用檢卵燈照視畫(huà)出氣室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大頭向上)用碘酊和酒精消毒氣室端用鋼錐在氣室中央錐一小孔。用注射器吸取病毒懸液，沿氣室端所穿小孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。用熔化的石蠟封孔，置孵卵箱內(nèi)繼續(xù)孵育，每天翻卵1-2次，24h內(nèi)死亡者廢棄。方法二：1.2.同方法一用熔化的石蠟封孔，置孵卵箱內(nèi)繼續(xù)孵育，24h內(nèi)死亡者廢棄。將卵橫放在卵座上，胚胎位置向下。在卵長(zhǎng)徑的1/2處用碘酊和酒精消毒
5、。用鋼錐打一小孔，將針頭刺入約1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml。（二）絨毛尿囊膜接種主要用于痘V和皰疹V的分離和增殖。方法一：取10-12日齡雞胚，畫(huà)出氣室部，消毒。在氣室端的卵殼上開(kāi)一1.5×1.5cm的口用滅菌眼科鑷子撕去一小片內(nèi)殼膜滴入接種物用膠布或透明膠紙封閉切口方法二：（做人工氣室）在胚胎附近近氣室處，選擇血管較少的部位，用電烙器在卵殼上烙一個(gè)直徑約3-4mm的烤焦圈。用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵殼，造成卵窗。在氣室端中央鉆一個(gè)小孔。用針尖挑破卵窗中心的殼膜，切勿損傷其下的絨毛尿囊膜，滴加生理鹽水于刺破處。用橡皮
6、乳頭緊貼于氣室中央小孔上吸氣，造成氣室內(nèi)負(fù)壓，使卵窗部位的絨毛尿囊膜下陷而形成人工氣室，此時(shí)可見(jiàn)滴于殼膜上的生理鹽水迅速滲入。用1ml注射器滴2-3滴接種物于絨毛尿囊膜上。用透明膠紙封住卵窗，或用玻璃紙蓋于卵窗中，周圍涂上熔化的石蠟密封，氣室中央的小孔用石蠟密封。胚橫臥于卵箱中，不許翻動(dòng)，保持卵窗向上。（三）尿囊腔接種主要用于正粘V和副粘V，如流感V、新城疫V的分離和增殖。選用10-11日齡的雞胚，畫(huà)出氣室和胚位在氣室接近胚體處用碘酊和酒精進(jìn)行消毒用鋼錐穿一小孔將注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.1-0.2ml接種物用石蠟封口，
7、并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并檢卵一次，24h內(nèi)死亡者廢棄。九、NDV接種雞胚后對(duì)雞胚的影響尿囊腔接種9-10日齡雞胚 強(qiáng)毒株在接種后30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以頭部、足趾、翅膀出血最為明顯。十、收毒收毒前將雞胚直立放置于4℃冰箱半小時(shí)以上，凍死胚胎，防止出血。 根據(jù)接種途徑的不同，收獲相應(yīng)的材料絨毛尿囊膜接種收獲接種部位絨毛尿囊膜尿囊腔接種收獲尿囊液（5-8ml）卵黃囊接種收獲卵黃囊或胚體羊膜腔接種收獲羊水（0.5-1ml）十一、試驗(yàn)報(bào)告作業(yè)常用的雞胚接種方法有哪些?簡(jiǎn)要說(shuō)明雞胚的結(jié)構(gòu)及各部分
8、結(jié)構(gòu)的功能。用雞胚來(lái)進(jìn)行病毒的培養(yǎng)要注意哪些問(wèn)題?如何區(qū)分無(wú)精卵、死胚、活胚？用于病毒培養(yǎng)的系統(tǒng)主要有哪些？
