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《第二章_發(fā)酵菌種選育》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、第二章生產(chǎn)中常用菌種的分離、選育和保藏第一節(jié)菌種的分離篩選第二節(jié)培養(yǎng)分離第三節(jié)工業(yè)微生物育種第四節(jié)菌種的保藏及活化帶圖象分析系統(tǒng)的微生物菌種 顯微觀察裝置第一節(jié)菌種的分離一、菌種的來源根據(jù)資料直接向有科研單位、高等院校、工廠或菌種保藏部門索取或購買；從大自然中分離篩選新的微生物菌種。二、優(yōu)良菌種的性能在較短發(fā)酵周期內(nèi)能產(chǎn)生有價值的發(fā)酵產(chǎn)品；能在廉價原料的培養(yǎng)基上快速生長并大量合成目的產(chǎn)物；對生長條件要求不高；易于從發(fā)酵液中提取產(chǎn)物；生長速度快，不易被污染；對人類、動植物以及環(huán)境沒有危害；遺傳特性穩(wěn)定，不易退化，易
2、于進行基因操作。三、分離思路新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產(chǎn)的要求、菌種的特性，采用各種篩選方法，快速、準(zhǔn)確地把所需要的菌種挑選出來。實驗室或生產(chǎn)用菌種若不慎污染了雜菌，也必須重新進行分離純化。有了優(yōu)良的菌種，還要有合適的工藝條件和合理先進的設(shè)備與之配合。定方案：首先要查閱資料，了解所需菌種的生長培養(yǎng)特性。采樣：有針對性地采集樣品。增殖：人為地通過控制養(yǎng)分或培養(yǎng)條件，使所需菌種增殖培養(yǎng)后，在數(shù)量上占優(yōu)勢。分離：利用分離技術(shù)得到純種。發(fā)酵性能測定：進行生產(chǎn)性能測定。這些特性包括形態(tài)、培養(yǎng)特征、營養(yǎng)要求、
3、生理生化特性、發(fā)酵周期、產(chǎn)品品種和產(chǎn)量、耐受最高溫度、生長和發(fā)酵最適溫度、最適pH值、提取工藝等。四、新種分離與篩選的步驟菌種篩選主要步驟調(diào)查研究及查閱充分的資料↓設(shè)計實驗方案↓確定采集樣品的生態(tài)環(huán)境 采樣↓確定特定的增殖條件 增殖培養(yǎng)↓確定特殊的選擇培養(yǎng)基及可能的↓定性或半定量快速檢出法 平板分離↓原種斜面↓確定發(fā)酵培養(yǎng)基礎(chǔ)條件 篩選↓初篩（1株1瓶）↓復(fù)篩（1株3～5瓶）↓結(jié)合初步工藝條件摸索 再復(fù)篩（1株3～5瓶）↓3～5株↓單株純種分離↓生產(chǎn)性能試驗↓→毒性試驗 菌種鑒定（一）采樣1、采樣對象以采集土壤為
4、主。一般園田土和耕作過的沼澤土中，以細菌和放線菌為主；富含碳水化合物的土壤和沼澤地中，酵母和霉菌較多，如一些野果生長區(qū)和果園內(nèi)。采樣的對象也可以是植物，腐敗物品，某些水域等。從自然界篩選2、采樣季節(jié)：以溫度適中，雨量不多的秋初為好。3、采土方式：在選好適當(dāng)?shù)攸c后，用小鏟子除去表土，取離地面5-15cm處的土約10g，盛入清潔的牛皮紙袋或塑料袋中，扎好，標(biāo)記，記錄采樣時間、地點、環(huán)境條件等，以備查考。為了使土樣中微生物的數(shù)量和類型盡少變化，宜將樣品逐步分批寄回，以便及時分離。（二）增殖培養(yǎng)為了容易分離到所需的菌種，
5、讓無關(guān)的微生物至少是在數(shù)量上不要增加，可以通過配制選擇性培養(yǎng)基，選擇一定的培養(yǎng)條件來控制。例如碳源利用的控制，可選定糖，淀粉、纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長，而其它微生物就可能死亡或淘汰。這樣對下階段的純種分離就會順利得多。（三）培養(yǎng)分離盡管通過增殖培養(yǎng)效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態(tài)。因此還必須分離，純化。在這—步，增殖培養(yǎng)的選擇性控制條件還應(yīng)進一步應(yīng)用，而且控制得細一點，好一點。純種分離的方法有劃線分離法、稀釋分離法。1.稀釋平皿分離法1.稀釋
6、平皿分離法100ml1g9ml9ml9ml9ml9ml9ml1/1001/100010-810-710-610-510-41ml1ml1ml1ml1ml(1)稀釋1.稀釋平皿分離法b.涂布平皿分離法a.傾注平皿分離法2.平皿劃線分離法a.分區(qū)劃線分離法b.連續(xù)劃線分離法（四）篩選這一步是采用與生產(chǎn)相近的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通過三角瓶的容量進行小型發(fā)酵試驗，以求得適合于工業(yè)生產(chǎn)用菌種。（五）毒性試驗自然界的一些微生物是在一定條件下產(chǎn)毒的，將其作為生產(chǎn)菌種應(yīng)當(dāng)十分當(dāng)心，尤其與食品工業(yè)有關(guān)的菌種，更應(yīng)慎重。據(jù)有的國家規(guī)定
7、，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草桿菌作為食用無須作毒性試驗外，其他微生物作為食用，均需通過兩年以上的毒性試驗。第二節(jié)培養(yǎng)分離從自然界中分離培養(yǎng)微生物是菌種選育的重要和基礎(chǔ)的步驟。到目前為止，還沒有一種分離培養(yǎng)方法能揭示一個試樣中所包含的所有微生物總數(shù)和種類。在任一試樣中所存在的微生物僅為極少數(shù)特定種類的菌株；在工業(yè)微生物篩選過程中，應(yīng)及時調(diào)整檢測方法，以與各種不同類型的生長和代謝之微生物相適應(yīng)。因此，建立一更為科學(xué)的和針對性不強的分離方法是必要的。一、成功的分離培養(yǎng)方法(1)認(rèn)真考慮所需產(chǎn)品的
8、特征和生產(chǎn)過程；(2)制訂初步的篩選標(biāo)準(zhǔn)；(3)將生態(tài)學(xué)方法運用到分離和篩選過程。二、將生態(tài)學(xué)方法用于培養(yǎng)分離的一般思路要點1．羅列出所要分離的微生物類群；2．根據(jù)所采集樣本的各種生態(tài)參數(shù)，描述所要分離的微生物之生態(tài)系統(tǒng)或棲息地：3．將若干樣本分成若干類型，如植物和植物各部，土壤(類型和土層)、巖石、水、昆蟲和發(fā)酵食品等；4．羅列出所要考察和測量的環(huán)境參數(shù)，如pH、鹽分、
