全自動(dòng)電泳儀課件

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1、電泳技術(shù)與自動(dòng)化電泳是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電極的作用下在液體介質(zhì)中的泳動(dòng)。㈠電泳技術(shù)的分類1、基礎(chǔ)的電泳技術(shù)⑴淀粉凝膠電泳⑵瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是一種實(shí)用的電泳技術(shù)。它用的介質(zhì)是一種純化的、主要是中性部分的瓊脂，即瓊脂糖。這一技術(shù)已成功能應(yīng)用到血清蛋白、血紅蛋白、乳酸脫氫酶及肌酸激酶、脂蛋白等物質(zhì)的分離。瓊脂糖優(yōu)點(diǎn)是對(duì)蛋白質(zhì)的親和力低，干燥后透明度高，便于密度檢測(cè)。⑶醋纖膜電泳⑷圓盤電泳⑸聚丙酰胺凝電泳⑹等電聚焦電泳⑺二維電泳⑻高分辨電泳1、毛細(xì)管電泳2、與免疫學(xué)技術(shù)結(jié)合衍生出的電泳技術(shù)⑴免疫電泳⑵交叉免疫電泳⑶對(duì)流

2、免疫電泳⑷免疫固定電泳廣泛用于蛋白質(zhì)的鑒定。它是免疫蛋白混合液在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，再在膠上直接加入相應(yīng)抗血清，抗原抗體復(fù)合物沉淀下來(lái)。這些免疫沉淀物在凝膠上固定下來(lái)，不沉淀的蛋白質(zhì)在膠上可以洗脫。對(duì)凝膠進(jìn)行染色，即可將蛋白質(zhì)鑒定出來(lái)。目前廣泛應(yīng)用于骨髓病蛋白的評(píng)價(jià)上。㈡電泳技術(shù)與自動(dòng)化1、電泳系統(tǒng)：HYDRASYS全自動(dòng)電泳系統(tǒng)，以瓊脂糖凝膠為載體，自動(dòng)點(diǎn)樣、電泳孵育、染色、脫、烘干。采用微孔濾紙滲透的專利點(diǎn)樣技術(shù)，電腦程控化管理，快捷簡(jiǎn)便的人機(jī)對(duì)話2、HYRYS-PHORFSIS光密度掃描儀，程序化多功能全自動(dòng)學(xué)密度儀。

3、血清蛋白電泳血清蛋白質(zhì)在一種指定的緩沖液，直流電場(chǎng)中，每種蛋白質(zhì)按各自的速度遷移，根據(jù)它們所帶的電荷而分離。㈠正常血清電泳分離出5個(gè)區(qū)帶：白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白。每個(gè)區(qū)帶含1種或多種血清蛋白成分。按遷移遞減次序排列依次是1、白蛋白:遷移最快，最大的部分，靠近凝膠的陽(yáng)極2、α1球蛋白:相當(dāng)于α1-抗胰蛋白酶及血清類粘蛋白3、α2球蛋白:相當(dāng)于：觸珠蛋白、α2巨球蛋白、血漿銅藍(lán)蛋白、GC球蛋白及α脂蛋白4、β球蛋白:相當(dāng)于：轉(zhuǎn)鐵蛋白、β脂蛋白及補(bǔ)體、特殊情況下，可遷移成清晰的β1和β2帶。5、γ球蛋白:

4、相當(dāng)于血清免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）圖譜(正常)㈡特殊情況1、單克隆免疫球蛋白病出現(xiàn)異常的尖峰，通常出現(xiàn)遷移到γ區(qū)，但有時(shí)遷移到β或α2區(qū)。但并非所有的單克隆免疫蛋白均為惡性型的。單克隆免疫球蛋白電泳圖譜本周蛋白(免疫固定電泳)2、非惡性型或獨(dú)特型γ球蛋白病有下列特征①單克隆的峰值弱?、趩慰寺〗M分的濃度整個(gè)過(guò)程無(wú)變化③多克隆免疫球蛋白不減少④本周蛋白很少出現(xiàn)此類病人可檢測(cè)免疫固定電泳，確定為哪類單克隆免疫球蛋白且必須有規(guī)律地監(jiān)控這類病人3、年齡變化:10到16歲以前，γ球蛋白未達(dá)到正常水平。達(dá)到40歲時(shí)，白蛋白和γ球

5、蛋白通常增加。4、臍帶的表現(xiàn):白蛋白減少，β和α2球蛋白減少。γ球蛋白正常（主要來(lái)自母體）㈣白蛋白區(qū)帶的改變1、雙白蛋白血癥遺傳性變異、大劑量β酰胺類抗生素治療、胰蛋白酶對(duì)白蛋白內(nèi)部水解所致胰腺炎2、近乎完全缺乏區(qū)帶先天性白蛋白缺乏癥3、白蛋白減少4、高白蛋白血癥血液濃縮㈤α1球蛋白區(qū)帶的改變①減少肝功能衰竭、營(yíng)養(yǎng)不良、蛋白丟失、先天性α1抗胰蛋白酶缺乏②增多炎癥，常伴有α2球蛋白㈥α2球蛋白區(qū)帶的改變1、雙區(qū)帶現(xiàn)象結(jié)合珠蛋白表型差異、單克隆性游離輕鏈遷移2、減少肝功能衰竭、營(yíng)養(yǎng)不良、蛋白丟失、血管內(nèi)溶血結(jié)合珠蛋白下降3、增多

6、炎癥綜合征、腎病綜合征㈦?球蛋白區(qū)帶改變1、減少肝功能衰竭、低補(bǔ)C32、增多非單克隆因素㈧γ球蛋白區(qū)帶變化1、低γ球蛋白血癥2、高γ球蛋白血癥血清蛋白電泳圖譜變化表血紅蛋白電泳pH8.6TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳點(diǎn)樣EDGKJH(異常條帶)-A2FA+（正常條帶）在HbA前出現(xiàn)——快速異常：HbH，J，K組在HbA后出現(xiàn)——慢速異常：HbG，D，E組圖譜1磷酸鹽緩沖液(pH6.5)主要用于HbH和HbBarts的檢出HbH泳向（+），HbBarts則在點(diǎn)樣點(diǎn)不動(dòng)，而其余的血紅蛋白都向（-）TEB緩沖液(pH8.6)適合于檢出H

7、bA、HbA2、HbS、HbC，但HbF不易與HbA分開(kāi)，HbH與HbBarts不能分開(kāi)和顯示箭頭所指處為點(diǎn)樣點(diǎn)3和6為正常對(duì)照標(biāo)本，1、2、4、5為病人標(biāo)本圖2臨床應(yīng)用：珠蛋白生成障礙性貧血α-珠貧：正常α-珠蛋白合成減少的Hb病β-珠貧：正常β-珠蛋白合成減少的Hb病αβ-珠貧：正常αβ-珠蛋白合成均減少的Hb病尿蛋白電泳分析與臨床應(yīng)用尿蛋白的電泳分析主要根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量及電荷特性而將其分離，形成電泳區(qū)帶，染色，并用光密度掃描儀結(jié)合總蛋白定量，便可得出各區(qū)帶蛋白的含量。用尿標(biāo)本進(jìn)行電泳分析，并將尿標(biāo)本中的各種蛋白成分按

8、分子量大小排列，明確各種蛋白成分及所占比例，從而了解腎臟的病變部位。方法準(zhǔn)確、靈敏度高，容易實(shí)現(xiàn)，僅用常規(guī)尿標(biāo)本。（最好是晨尿）可以對(duì)腎臟疾病作早期診斷/鑒別診斷及分型、治療效果的觀察、腎活檢（屬創(chuàng)傷性診斷）前的篩查、甚至代替腎活檢。尿蛋白的概念：1）生理尿：50-150mg