黑素瘤抗原3基因及蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)

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1、黑素瘤抗原3基因及蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)【關(guān)鍵詞】肺腫瘤；非小細(xì)胞肺癌；黑素瘤抗原3；免疫治療【Abstract】ObjectiveTodeterminetheexpressionofmelanomaantigen3mRNAanditsencodingtumorantigeninnonsmallcelllungcancer(NSCLC)andtoexplorethepossibilityofusingthisantigenasavaccineforimmunotherapyinNSCLCpatients.MethodsTheexpressionofMAGE3mRNAa

2、ndproteinin3humanlungcancercelllinesand56NSCLCsamplestogetherallungsamplesinedbyRTPCRandfloetry(FCM).ResultsAll3humanlungcancercelllinesexpressedMAGE3mRNAandprotein.Ofthe56NSCLCsamples,30casesexpressedMAGE3mRNAand26casesexpressedMAGE3protein,butnoneoftheadjacentnormallungsamplesexpressedM

3、AGE3mRNAorprotein.ConclusionMAGE3mRNAandproteinareexpressedatahighfrequencyinNSCLCsamples,andthisantigenmaypossiblybethesuitabletargetforimmunotherapyinNSCLCpatients.【Keys,nonsmallcelllungcancer,melanomaantigen3,immunotherapy黑素瘤抗原3（MAGE3）基因是最初在惡性黑素瘤中發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抗原基因，其編碼的抗原可以與人類白細(xì)胞抗原HLAA1結(jié)合，

4、被自體細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CTL）識別，使CTL產(chǎn)生特異性殺傷腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)［1］。目前研究表明，MAGE3基因在多種惡性腫瘤中均有表達(dá)，而在正常組織中，除睪丸和胎盤外，均無表達(dá)［2］。因此，作為一種CTL介導(dǎo)的腫瘤特異性免疫治療的適宜靶抗原，該基因在腫瘤免疫治療的研究中日益受到重視。本研究旨在檢測MAGE3mRNA及蛋白在我國非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）中的表達(dá)情況，探討以該抗原作為疫苗對NSCLC患者進(jìn)行免疫治療的可能性。1材料與方法1.1細(xì)胞系與標(biāo)本以人髓性甲狀腺癌細(xì)胞系TT作為陽性對照［1］，以小鼠成纖維細(xì)胞系3T3TK作為陰性對照。TT細(xì)胞、3T3TK和人肺癌細(xì)胞系SP

5、CA1、A549、A431購自上海中科院細(xì)胞庫，上述細(xì)胞系均貼壁生長于含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液中。56例NSCLC和相鄰正常肺組織標(biāo)本取自我院胸心外科的手術(shù)病例，其中男32例，女24例，年齡30～77歲，平均65.4歲；術(shù)后病理證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌29例，腺癌25例，大細(xì)胞癌2例。1.2總RNA抽提培養(yǎng)細(xì)胞每(5～10)×106個加入1mlTrizol裂解液；將標(biāo)本組織剪碎放入勻漿器中，每50mg加入1mlTrizol，徹底勻漿。將上述培養(yǎng)細(xì)胞和標(biāo)本組織的裂解物移入1.5mlEppendorf管中，室溫放置5min，加入200μl氯仿，振蕩混勻，室溫靜置5mi

6、n；1.3×104r/min，4℃離心15min，將上層水相轉(zhuǎn)移到干凈的1.5mlEppendorf管中，加入等體積的異丙醇，混勻后室溫放置10min；1.3×104r/min，4℃離心10min，棄上清，加入1ml75%乙醇，1.3×104r/min，4℃離心10min，棄上清，將沉淀置于室溫干燥10min，用DEPC處理水溶解，分光光度計定量。1.3逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第1鏈及PCR反應(yīng)按AMV逆轉(zhuǎn)錄酶(Promega公司)說明書配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，取2μg總RNA，加入3μlAMV逆轉(zhuǎn)錄酶，配成終體積為25μl的反應(yīng)體系，將該體系置于42℃孵育60min，94℃5min滅活酶

7、，貯存于-20℃待擴(kuò)增。MAGE3基因和內(nèi)對照βactin的擴(kuò)增引物由中科院生化所合成，序列分別為，MAGE3基因［3］：上游：5’TGGAGGACCAGAGGCCCCC3’，下游：5’GGACGATFATCAGGAGGCCTGC3’。βactin：上游：5ATCATGTCGGAGACCTACAACACCCCAGCC3。下游：5AAGAGAGCCTCGGGGCATCGGAACCGCTCA3。PCR反應(yīng)體系的配制及反應(yīng)條件詳見3討論MAGE基因編碼蛋白可在體內(nèi)誘導(dǎo)特