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1、反相高效液相色譜法測定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量潘見 汪翔 楊毅 金日生【摘要】目的建立同時(shí)測定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的反相高效液相色譜檢測方法。方法采用RestekPinnacleⅡC18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，配制流動相為甲醇∶四氫呋喃∶0.3%H3PO4水溶液=42∶13∶56，在流速為1.0ml/min，檢測波長為350nm，柱溫為室溫，進(jìn)樣量為10μl的情況下建立測定方法。結(jié)果木犀草素線性范圍為3.99～99.75μg/ml（r=0.9996），平均加樣回收率為105.9%，RSD=1.5%；芹菜素線性范圍為
2、4.095～102.375μg/ml（r=0.9996），平均加樣回收率為103.7%，RSD=2.5%。結(jié)論用該方法測定亳菊提取物中木犀草素及芹菜素的含量，具有分析時(shí)間較短，分離度高的特點(diǎn)?！娟P(guān)鍵詞】反相高效液相色譜法；木犀草素；芹菜素；亳菊提取物 Abstract：ObjectiveTodevelopareversed-phasehighperformanceliquidchromatographicmethodforthesimultaneousdeterminationofluteolinandapigenininChrysanthemum
3、morifoliumextract.MethodsTheseparationn（250mm×4.6mm，5μm）obilephaseataflol/min.Theabsorbanceonitoredat350nm.Thevolumeofinjectionl～99.75μg/ml（r=0.9996）forluteolinand4.095μg/ml～102.375μg/ml（r=0.9996）forapigenin.Theaveragerecoveriesethodusedforthedeterminationofluteolinandapigenini
4、ntheChrysanthemummorifoliumextracthasthecharacteristicsofshortretentionandhighresolution. Keyummorifoliumextract中藥菊花是菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥頭狀花序〔1〕，是一種常用中藥，具有疏風(fēng)、清熱、明目、解毒功效，臨床上用于治療高血壓病和冠心病等〔2〕。亳菊主產(chǎn)于安徽亳州、渦陽一帶〔3〕。菊花的有效部位主要有黃酮類、萜類、碳環(huán)芳香族酚酸類化合物（蔣惠娣．《中藥杭白菊心血管系統(tǒng)作用及活性成分研究
5、》．2004浙江大學(xué)博士學(xué)位論文）〔4〕。亳菊提取物成分復(fù)雜，為控制其產(chǎn)品質(zhì)量，依據(jù)菊花藥效物質(zhì)及藥理作用，建議以綠原酸、木犀草素、芹菜素和總黃酮4個(gè)指標(biāo)，構(gòu)建質(zhì)量評價(jià)體系。其中木犀草素具有消炎、抗過敏、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、降低兔實(shí)驗(yàn)性動脈粥樣硬化程度和降膽固醇等作用〔4，5〕；芹菜素具有抗腫瘤、抗炎、降血壓和舒張血管、抗動脈硬化和血栓癥、抗焦慮、抗菌、抗病毒等作用〔6〕。兩者藥理作用與亳菊的藥理作用相近，且兩者在亳菊提取物中含量較高。因此，建立同時(shí)測定木犀草素及芹菜素的HPLC測定方法，對亳菊提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及亳菊藥材的質(zhì)量控制具有重要的意義
6、?！ ?儀器與試藥poa.morifolium(Ramat.)Tzvel.cv.‘Boju’由安徽濟(jì)人藥業(yè)提供〕；亳菊提取物樣品（農(nóng)產(chǎn)品生物化工教育部工程研究中心研究制備）。 2方法與結(jié)果 2.1色譜條件色譜柱為RestekPinnacleⅡC18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相為甲醇∶四氫呋喃∶0.3%H3PO4=42∶13∶56；流速1.0ml/min；檢測波長350nm；柱溫為室溫；進(jìn)樣量10μl?！ ?.2對照品儲備液的制備精密稱取木犀草素、芹菜素對照品適量，用甲醇溶解配制成含木犀草素為399μg/ml及芹菜素為409.5μg
7、/ml的對照品混合溶液?！ ?.3供試品溶液的制備取亳菊提取物樣品約75mg，精密稱定置小燒杯中，用10ml甲醇超聲溶解，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中并定容搖勻，取部分溶液離心（10000r/min，5min），取上清液即得供試品溶液。 2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制從對照品儲備液中精密量取0.1，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml，分別置于10ml容量瓶中，甲醇定容，得到系列混合對照品溶液，各進(jìn)樣10μl，按照上述的色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得木犀草素回歸方程為Y=34778X-41681（r=0.9
8、996），線性范圍為3.99～99.75μg/ml；芹菜素回歸方程為Y=50871X-38471（r=0.9
