院感監(jiān)測(cè)計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)

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1、實(shí)驗(yàn)十三?十四醫(yī)院感染的微生物監(jiān)測(cè)及細(xì)菌計(jì)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握醫(yī)院感染微生物監(jiān)測(cè)常用培養(yǎng)?基的配制。2.掌握窈壓蒸汽火菌器使用及火菌效果的監(jiān)測(cè)方法。3.掌握空氣、物表、手、使川屮消毒液及無(wú)藺物品的監(jiān)測(cè)方法。4.掌握紫外線殺菌效果的監(jiān)測(cè)方法。二、實(shí)驗(yàn)材料1.試劑缶fl胨、牛肉膏(粉)、鉍化鈉、瓊脂、蒸餾水、無(wú)水磷酸氫二納、磷酸二氫鉀、葡萄糖、硫代硫酸鈉、卵磷脂、甘氨酸、吐溫-8()、10%NaOH、1NHC1、4%酚紅等。2.材料三角燒瓶、fi簡(jiǎn)、精密pH試紙、天平、高Ik蒸氣滅齒器、無(wú)菌試管、無(wú)菌平皿、加樣器、加樣尖、電爐、枯草桿菌黑色變種芽胞ATCC93

2、72)等。三、實(shí)驗(yàn)方法(一)常用培養(yǎng)基的配制1.普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板配2000ml成分:蛋白胨10g、十?肉膏(粉)5g、氯化鈉5g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml、pH7.2?7.4。上述各成份混合、溶解,校正pH。12CC20min火菌后,備用。2.營(yíng)養(yǎng)肉湯配500ml成分:蛋白胨10g、牛肉膏(粉)5g、氯化鈉5g、蒸餾水1000ml、pH7.2-7.4o上述各成份浞合、溶解,校正pH,分裝每管4?5ml,121°C20min火菌后,備用。3.中和劑配制配500ml成份:無(wú)水磷酸鉍二鈉2.83g、磷酸二鉍鉀1.36g、胰蛋白胨10g、牛肉粉3g、葡萄糖2

3、g、硫代硫酸鈉5g、卵磷脂3g、(=)"<酸3g、吐溫-8030ml0將各成分加入到IL蒸餾水中,待完全溶解后,加0.4%酚紅4ml,調(diào)PH至7.2?7.4(淡紅色),分裝每管4ml,121°C20min火菌P,備用。4.無(wú)菌鹽水:0.9%NaCI分裝每管5ml,121°C20min滅菌后,備川。(二)高壓蒸汽滅菌器的使用原理在密閉的條件K,蒸汽不能外池,使滅菌鍋內(nèi)壓力增尚,隨之蒸汽溫度也增高。高溫蒸汽有很強(qiáng)的穿透性,熱傳導(dǎo)快,使被滅蔭物品(Al溫度迅速上升,同吋含水多的環(huán)境卜蛋白質(zhì)較易凝固,通過(guò)凝固菌體蛋白而達(dá)到滅飽的目的。設(shè)備構(gòu)造高壓蒸汽滅菌器是一個(gè)雙

4、層的金屈圓筒,兩層之間盛水。外S豎厚,其上方有金屬厚蓋,鍋沿旁有螺栓,借以將鍋蓋緊閉,使鍋內(nèi)氣體不能外溢,因而蒸汽壓力升高,從而水蒸氣的溫度也相應(yīng)地升商。尚壓蒸汽滅苘器上裝奮排氣閥計(jì)可以顯示內(nèi)部的蒸汽壓力和溫度、安全活塞以調(diào)節(jié)蒸汽。K種類有手提式、S立式、橫臥式等。它們的構(gòu)造及火菌原理基本相同。高壓蒸汽火菌鍋壓力與溫度的關(guān)系見(jiàn)下表。壓力—溫度(°C)Kg/cm2磅0.3551080.70101161.05151211.4020127現(xiàn)在最常用的培養(yǎng)基火菌條件是1.05kg/cm2(121°C)20min,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能破壞培養(yǎng)菽的營(yíng)養(yǎng)成分。含糖的生化培養(yǎng)難

5、的火菌條件是0.7kg/Cm2(116r)15m‘n,或用流動(dòng)蒸汽法滅菌。器皿的滅菌可以1.05kg/cm220min。操作方法:1.將欲滅歯物品放入鍋內(nèi),關(guān)閉鍋門(mén),擰緊螺絲。確認(rèn)已經(jīng)密閉,方可進(jìn)入下一步操作。2.關(guān)閉排氣閥、排水閥,打開(kāi)進(jìn)水閥(補(bǔ)足水位)。3.打開(kāi)電源,加熱,使產(chǎn)生蒸汽。4.當(dāng)壓力表指針指達(dá)34kPa(5磅/英、r2,108°C)吋,打開(kāi)排氣閥,排出鍋內(nèi)冷氣。5.待鍋內(nèi)冷氣排盡后,關(guān)閉排氣閥。觀察壓力表升至1.05kg/cm2(121°0吋,開(kāi)始記吋。持續(xù)20min,至多不能超過(guò)30min,否則營(yíng)養(yǎng)物受破壞。7.切斷電源,讓鍋內(nèi)物品然冷卻

6、,不可馬上打開(kāi)排氣閥,以免發(fā)生意外。8.待鍋內(nèi)壓力降為零吋,XT可打開(kāi)鍋門(mén),取出物品。注意事項(xiàng):1.內(nèi)熱式火菌鍋,在通電前一定要補(bǔ)足鍋內(nèi)水位,否則加熱時(shí)會(huì)燒毀加熱管。2.排氣時(shí),必須待鍋內(nèi)冷氣完全排!li后才可關(guān)閉排氣閥加壓,否則達(dá)不到滅歯效果。3.每周必需定期用留點(diǎn)溫度計(jì)或嗜熱脂肪芽胞桿菌監(jiān)測(cè)滅菌效果。(三)蒸汽高壓鍋滅菌效果監(jiān)測(cè)生物監(jiān)測(cè)方法:將含有5X1O5?5Xl()6cfu嗜熱脂肪芽胞桿菌(ATCC7953)的溴甲酚紫蛋白胨水管分3點(diǎn)或5點(diǎn)與待滅尙物品一并放入界器內(nèi)。經(jīng)121°C20min滅菌后取出放入56°C?60'C溫箱內(nèi)培養(yǎng)7天,M吋放一支未

7、滅菌的桁示管作陽(yáng)性對(duì)照,若指示管顏色變黃或混濁即未達(dá)到滅菌效果,若培養(yǎng)蕋顏色不變或澄清則滅菌效果合格(四)空氣采樣及檢査方法1.采樣時(shí)間:選擇消毐處理后與進(jìn)行醫(yī)療活動(dòng)之前期間采樣。2.采樣高度:與地面垂直高度80?150cm。3.布點(diǎn)方法:室內(nèi)面積彡30m2,設(shè)一條對(duì)角線是取3點(diǎn),即中心一點(diǎn)。兩端各距墻lm處各一點(diǎn);室內(nèi)面積〉30m2,設(shè)東、南、西、北、中5點(diǎn),其屮東、南、西、北點(diǎn)均距墻1m。4.采樣及培養(yǎng)方法:用9cmH徑的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)暴露5分鐘P送檢培養(yǎng)。35°C24h培養(yǎng)檢測(cè)。5.結(jié)果計(jì)算:前蘇聯(lián)細(xì)菌學(xué)家?jiàn)W梅楊斯基認(rèn)為:在ifU積100c

8、m2的培養(yǎng)基表面,5min內(nèi)沉降的細(xì)菌數(shù)約和10L空氣中含的細(xì)菌一

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