toll樣受體2、9mrna在感染性早產(chǎn)患者外周血單個核細(xì)胞的表達(dá)及意義

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1、Toll樣受體2、9mRNA在感染性早產(chǎn)患者外周血單個核細(xì)胞的表達(dá)及意義董生鳳1羅艷2王豫黔2(1遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科貴州遵義563000)(2遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬(珠海)醫(yī)院婦產(chǎn)科廣東珠海519000)【屮圖分類號】R722.6【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1672-5085(2013)27-0067-02【摘要】目的探討感染性早產(chǎn)患者外周血單個核細(xì)胞Toll樣受體2、9mRNA的表達(dá)。方法收集31例早產(chǎn)患者部分胎盤胎膜組織行病理檢查,根據(jù)病檢分為早產(chǎn)感染組(17例)和早產(chǎn)非感染組(14例),門診進(jìn)行孕檢的正常孕婦作為正常對照組(10例)。(1)采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清屮的IL

2、-6水平;(2)應(yīng)用實時定量PCR技術(shù)檢測早產(chǎn)患者和正常對照組孕婦外周血單個核細(xì)胞TLR2、9的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果(1)TLR2mRNA在早產(chǎn)感染組患者外周血單個核細(xì)胞的表達(dá)水平顯著高于早產(chǎn)非感染組和正常對照組(P<0.05);而TLR9mRNA在早產(chǎn)感染組、早產(chǎn)非感染組和正常對照組外周血單個核細(xì)胞的表達(dá)水平無差異(P>0.05);(2)早產(chǎn)感染組患者血清屮IL-6水平明顯高于早產(chǎn)非感染組和正常對照組,差異有顯著性(P<0.05),但早產(chǎn)非感染組和正常對照組血清屮IL-6水平比較,差異無顯著性(P〉0.05>;(3)感染性早產(chǎn)患者外周血TLR2mRNA的表達(dá)水平與血淸屮IL-6

3、水平呈正相關(guān)(r=0.778,P<0.01)而TLR9mRNA的表達(dá)與IL-6不存在相關(guān)關(guān)系(r=0.0355,P=0.162)。結(jié)論感染性早產(chǎn)患者外周血單個核細(xì)胞表面TLR2mRNA表達(dá)增強(qiáng),提示TLR2參與了感染性早產(chǎn)的發(fā)生發(fā)展過程,其與血清中IL-6水平成正相關(guān),可作為早期預(yù)測早產(chǎn)宮內(nèi)感染的指標(biāo)?!娟P(guān)鍵詞】Toll樣受體早產(chǎn)宮內(nèi)感染早產(chǎn)是妊娠期常見的并發(fā)癥之一,對圍產(chǎn)兒的危害很大,全球發(fā)生率一直保持在5%-15%,其屮由感染引起的早產(chǎn)在臨床上占到40%左右[1],感染因素在早產(chǎn)屮的作用越來越受到人們的重視。TLR2是一種介導(dǎo)先天性免疫的特異受體,它廣泛參與炎癥反應(yīng)和免疫

4、應(yīng)答,Kim[2]等通過免疫組化方法對胎盤組織的研宄發(fā)現(xiàn),早產(chǎn)尤其是合并妊娠絨毛膜羊膜炎時TLR2表達(dá)量明顯增加,提示TLR2可能通過炎癥反應(yīng)或是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡參與早產(chǎn)分娩發(fā)動。TLR9己經(jīng)被證實是哺乳類動物細(xì)胞識別細(xì)菌DNA中免疫刺激序列CpG的受體,從而激活哺乳動物細(xì)胞天然免疫機(jī)制的發(fā)現(xiàn),具右重要的生物學(xué)意義與成用價值起作用[3】。本研究通過檢測TLR2、9mRNA在早產(chǎn)患者外周血單個核細(xì)胞的表達(dá),探討其與感染性早產(chǎn)的關(guān)系及在預(yù)測早產(chǎn)中的價值。1資料和方法1.1病例選擇選擇2007年5月至2007年10月在我院產(chǎn)科分娩的早產(chǎn)孕婦31例(孕周28—36周+6),其中胎膜早破17例。

5、按病理學(xué)檢查有無絨毛膜羊膜炎分為兩組:早產(chǎn)感染組(即冇絨毛膜羊膜炎)17例;早產(chǎn)非感染組14例(即無絨毛膜羊膜炎);另選取同期在我院圍產(chǎn)保健門診定期檢查的同孕周正常孕婦(28—36周+6)10例作為對照組。1.1.1納入標(biāo)準(zhǔn)凡符合以下標(biāo)準(zhǔn)者納入本研究,孕周明確、單胎、分娩孕周為28-36+6周和(或)有胎膜早破、生殖泌尿道感染因素存在。經(jīng)胎盤胎膜組織病理學(xué)檢查有無絨毛膜羊膜炎再分為旱產(chǎn)感染組(17例),早產(chǎn)非感染組(14例)。對照組:門診孕檢孕周明確、單胎、無宮縮、追蹤至37周內(nèi)未分娩。1.1.2排除范圍病理妊娠如:妊娠期高血壓疾病、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、前置胎盤、胎盤早剝、合并有

6、糖尿病、甲亢等內(nèi)、外科疾病。1.1.3組織學(xué)絨毛膜羊膜炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)在絨毛膜及羊膜組織中,中性粒細(xì)胞浸潤每高倍鏡視野〉5個,即為存在感染,可診斷為絨毛膜羊膜炎。絨毛膜羊膜炎往往伴發(fā)急性壞死性蛻膜炎,而且蛻膜炎的嚴(yán)重程度常超過絨毛膜羊膜炎[4】。1.2引物、試劑及儀器TLR2、9及β-actin引物由大連TakaRa生物工程公司合成。淋巴細(xì)胞分離液購自美國Sigma公司,總RNA提取液Trizol購于美國Gibco公司,RT-PCR所用酶及反應(yīng)試劑盒購于大連TakaRa生物工程公司。實吋熒光定量PCR儀為美國Bio-Rad公司生產(chǎn),凝膠成像圖像分析儀為美國Syngene公司生

7、產(chǎn),紫外分光光度計為美國Beckman公司生產(chǎn)。1.3方法1.3.1外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)分離純化抽取外周靜脈血4ml,以lml肝素抗凝,加入等量的1640液,用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個核細(xì)胞,重懸在含10%胎牛血清的完全RPMI1640中,置一8CTC冰箱保存。1.3.2細(xì)胞總RNA制備及逆轉(zhuǎn)錄cDNA采用Trizol一步法總RNA提取試劑盒提取外周血單個核細(xì)胞內(nèi)總RNA,紫外分光光度計測定總RNA濃度及純度,篩選OD260/OD280(R比值)比值為1

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