槐米中蕓香苷

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1、槐米中蕓香苷（蘆丁）的提取與鑒定時(shí)間：2010-02-0612:57:37來源：作者：?分享：???????????收藏：????????細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)大鼠骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)蛋白實(shí)驗(yàn)TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(ChIP)凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)分子克隆實(shí)驗(yàn)原位雜交DNA甲基化檢測(cè)高分辨熔解曲線(HRM)摘要：?蕓香苷結(jié)構(gòu)中含有酚羥基,具酸性,能溶于堿水,當(dāng)加入酸溶液后,則蕓香苷沉淀析出.蕓香苷的精制是利用其可溶于熱水,難溶于冷水的性質(zhì)與雜質(zhì)分離.【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、學(xué)

2、會(huì)運(yùn)用堿溶酸沉法,從槐米中提取、精制蘆丁,并進(jìn)行水解.2、學(xué)會(huì)用顯色反應(yīng)及紙色譜法檢識(shí)黃酮類化合物.【實(shí)驗(yàn)原理】???采用堿溶酸沉法提取,其原理是蕓香苷結(jié)構(gòu)中含有酚羥基,具酸性,能溶于堿水,當(dāng)加入酸溶液后,則蕓香苷沉淀析出.蕓香苷的精制是利用其可溶于熱水,難溶于冷水的性質(zhì)與雜質(zhì)分離.【實(shí)驗(yàn)材料】???設(shè)備:電爐、托盤天平、500ml燒杯、量筒、玻璃棒、移液管、紗布、溫度計(jì)、滴管、抽濾裝置、研缽、250ml圓底燒瓶、冷凝管、水浴鍋、pH試紙、新華色譜濾紙、紫外燈、展開筒、試管、試管架.???藥品:槐米粗粉、濃鹽酸、蒸

3、餾水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氫氧化鋇、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品水溶液、鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品水溶液、正丁醇、醋酸、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品、氨水、三氯化鋁、濃硫酸、α–萘酚、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉、鎂粉、苯胺-鄰苯二甲酸、醋酸鎂【實(shí)驗(yàn)步驟】1、蕓香苷的提取:???稱取槐米粗粉20g,置500ml燒杯中,加入0.4%硼砂沸水溶液200ml,在攪拌下加石灰乳,調(diào)至pH8～9,加熱微沸20分鐘(注意保持pH8～9),并隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分,趁熱用四層紗布濾過.濾渣同樣操作再提取一次,合并兩次濾液.濾液在60℃～70℃

4、用濃鹽酸調(diào)至pH5左右,靜置過夜使沉淀完全,抽濾,沉淀用蒸餾水洗2～3次至中性,抽干,置空氣中晾干,得蕓香苷粗品.2、蕓香苷的精制:???稱一定重量的粗品,按約1∶200的比例懸浮于蒸餾水中,煮沸10分鐘使其全部溶解,趁熱抽濾,冷卻濾液,靜置析晶.抽濾,置空氣中晾干或60℃～70℃干燥,得精制蕓香苷,稱重,計(jì)算得率.3、蕓香苷的水解:???取蕓香苷1g,研細(xì)后置于250ml圓底燒瓶中,加入2%硫酸溶液100ml,直火微沸回流約40分鐘,至析出鮮黃色沉淀不再增加為止,放冷抽濾,濾液保留作糖檢查,沉淀用少量水洗去酸,抽

5、干水分,晾干稱重,得粗制槲皮素,然后用乙醇(95%乙醇約15ml)重結(jié)晶即得精制槲皮素.4、鑒定:?(1)糖的紙色譜鑒定:???樣品:取上述濾去槲皮素的水解母液20ml,攪拌加飽和的氫氧化鋇水溶液中和至pH7,濾去沉淀,濾液濃縮至1～2ml得樣品液???對(duì)照品:葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品水溶液、鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品水溶液???支持劑:新華色譜濾紙(中速15cm×7cm)???展開劑:正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)上層液???顯色劑:苯胺-鄰苯二甲酸試劑噴霧,105℃烘10分鐘,顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)?(2)蕓香苷、槲皮素的紙色譜鑒定:???

6、樣品:1)自制蕓香苷乙醇液????????2)自制槲皮素乙醇液體???對(duì)照品:1)蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品乙醇液??????????2)槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品乙醇液展開劑:1)正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)上層液??????????2)15%醋酸水溶液???顯色劑:1)先在可見光下觀察斑點(diǎn)顏色,然后在紫外燈下觀察斑點(diǎn)顏色??????????2)經(jīng)氨氣熏后再觀察??????????3)噴三氯化鋁試劑后再觀察?(3)Molish反應(yīng):???取蕓香苷少許置小試管中,加乙醇0.5ml,加10%α萘酚溶液1ml振搖使溶解,沿管壁徐徐加入濃硫酸約

7、0.5ml,靜置.觀察兩層溶液的界面變化,出現(xiàn)紫色環(huán)者為陽(yáng)性.以同法試驗(yàn)槲皮素,比較二者的不同.?(4)酸性實(shí)驗(yàn):???取小試管四支為一組,共二組,第一組每管中加入蕓香苷1mg,第二組每試管中加入槲皮素1mg,每組分別加稀氨水、5%碳酸氫鈉溶液、5%碳酸鈉溶液和1%氫氧化鈉溶液各2ml,振搖后,觀察各管溶解情況,溶解的溶液應(yīng)呈黃色.再加鹽酸數(shù)滴,黃色應(yīng)褪去或變淺,并有沉淀或渾濁析出.?(5)鎂粉-鹽酸反應(yīng):???取蕓香苷1mg,加乙醇1～2ml在水浴上加熱溶解,加鎂粉約50mg,滴加幾滴濃鹽酸,溶液由黃色漸變紅色者

8、,表示有黃酮類化合物.以同法試驗(yàn)槲皮素.?(6)三氯化鋁反應(yīng):???取蕓香苷1mg,加甲醇1～2ml在水浴上加熱溶解,加入1%三氯化鋁甲醇溶液2～3滴,呈鮮黃色,以同法試驗(yàn)槲皮素.?(7)醋酸鎂反應(yīng):???取蕓香苷1mg,加甲醇1～2ml水浴中加熱溶解,加1%醋酸鎂甲醇溶液2～3滴,呈黃色熒光反應(yīng).以同法試驗(yàn)槲皮素.【實(shí)驗(yàn)說明】1、硼砂的作用,蕓香苷分子中因