中藥材知母中皂苷類成分的分析

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1、中藥材知母中有效成分分析概述中藥化學(xué)袁航藥材概述理化性質(zhì)化學(xué)成分結(jié)構(gòu)含量測定檢識鑒別體內(nèi)代謝知母·概述【植物來源】：百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.的干燥根莖【本草考證】：首載于《詩經(jīng)·爾雅》《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為中品“味苦寒，主消渴，熱中，降邪氣，肢體浮腫，下水，補不足，益氣……”【功效】：清熱瀉火、滋陰潤燥【臨床應(yīng)用】：煩熱消渴、熱性病高燒、肺熱咳嗽、結(jié)核病發(fā)熱、糖尿病、大便干燥皂苷【數(shù)量】：知母中現(xiàn)已有文獻報道的甾體皂苷成分約有40種【含量】：在根莖中含量約為6%【分類】：據(jù)皂苷元的母核不同可分為螺甾烷類皂苷和呋甾烷類皂苷兩大類。螺甾

2、烷類：以菝葜皂苷元連接不同的糖鏈構(gòu)成的知母皂苷A，如皂苷A-Ⅰ,A-Ⅲ等；馬爾可皂苷元、新吉托皂苷元、薯蕷皂苷元等及其與糖組成的皂苷呋甾烷類：知母皂苷B，如知母皂苷B-Ⅰ、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B-Ⅲ等，知母皂苷E1、E2、N、O，知母皂苷H1、H2、I1、I2【結(jié)構(gòu)差異】：3-位羥基連接的糖鏈19-位的取代基（-OH或-OCH3）雙鍵的位置（Δ5,6,Δ18,19）22-位取代基有無【藥理作用】：防治老年癡呆癥、保護腦缺血損傷、抗凝血、抗氧化、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松、抗炎、降血壓、降血糖及降血脂等藥理活性。黃酮雙苯吡酮類黃酮化合物：芒果苷、新芒果苷、異芒果苷等一類四羥基吡酮的碳

3、酮苷龍膽科、藤黃科，百合科植物抗氧化、抗腫瘤、抗炎、降糖、抑菌，清熱作用的主要有效成分甾體皂苷：1、苷元結(jié)晶性好，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等有機溶劑2、皂苷多為無定性粉末，易溶于熱水，稀醇3、均具有旋光性，多為左旋4、具有溶血性5、皂苷的乙醇溶液可與甾醇形成難溶的分子復(fù)合沉淀物6、顏色反應(yīng)：L-B,R-H反應(yīng)可與三萜皂苷進行區(qū)分雙苯吡酮類：水溶性較差結(jié)構(gòu)修飾：將芒果苷3-位酚羥基轉(zhuǎn)化成3-ONa在4-位引入磺酸鈉基，制備得芒果苷磺酸鈉鹽理化性質(zhì)2010版藥典中中藥知母TLC鑒別指標成分芒果苷知母皂苷B-Ⅱ前處理稀乙醇，超聲20min30%丙酮，超聲20min薄層板類型聚酰胺

4、薄膜板硅膠G薄層板展開劑乙醇-水（1:1）正丁醇-冰醋酸-水（4:1:5）顯色365nm紫外光香草醛硫酸試液，105℃加熱至斑點清晰薄層色譜法薄層色譜法純度鑒別：知母皂苷A-Ⅲ和知母皂苷C正丁醇-醋酸乙酯-水（4∶1∶5，上層）氯仿-甲醇-水（65∶35∶10，上層）醋酸乙酯-乙醇-水（9∶2∶1）3種色譜系統(tǒng)均顯單一的藍色斑點10％磷鉬酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰香草醛（3-甲氧基-4-羥基苯甲醛）-濃硫酸顯色劑是薄層色譜廣泛使用的一種通用顯色劑應(yīng)用：在揮發(fā)油、萜類、甾類和皂苷等中藥成分的薄層分離中，多能顯示出顏色各異的斑點未改進配制：含有1%香草醛的濃硫酸溶液缺點：粘度高

5、噴顯困難，往往使顯色點呈“花斑狀”，模糊不清易將薄層表面噴散，對薄層掃描定量影響很大改進方法：將濃硫酸中加入一定量的水以降低其粘度結(jié)果：70%或60%的硫酸配置的顯色劑，對樣品顯色的靈敏度、顯色速度和呈色穩(wěn)定性與濃硫酸配制基本相同?，F(xiàn)配制方法：1g的香草醛加到60%的硫酸100ml中（1%）15g香草醛+250ml乙醇+2.5ml濃硫酸（5%）5g香草醛，用10%硫酸乙醇100ml（無水乙醇）（5%）顯色劑變革知母總皂苷老鼠灌胃知母皂苷B-Ⅱ和知母皂苷B-ⅢHPLC-ELSD-MS皂苷在血液中含量少不需要對照品，可直接用分子量進行定性分析高靈敏度、高專屬性知母大部分皂苷結(jié)構(gòu)相似

6、血樣中內(nèi)源性物質(zhì)干擾比較大梯度洗脫：流動相為乙腈:水(含0.3%甲酸)0~10min,5%~20%乙腈10~15min,20%~23%乙腈15~25min,23%乙腈25~50min,23%~100%乙腈50~60min,100%乙腈知母皂苷入血成分研究樣品前處理：30ul血漿樣本，<<文獻用量提?。阂译娴鞍踪|(zhì)沉淀法流動相選擇：乙腈∶1mmol·L-1乙酸銨溶液(30:70，V:V)色譜柱：AgilentZorbaxSB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)峰型好，分離度佳分析時間長AlltimaHPC18柱(2.1mm×50mm，5μm)良好峰型縮短分析時間：t（知母皂

7、苷B-Ⅱ）=1.78mint(重樓皂苷，內(nèi)標)=1.96min分析周期3min血液中知母皂苷B-Ⅱ測定甲醇蛋白沉淀提取知母皂苷B-Ⅱ在甲醇體系中C-22的羥基與C-22甲氧基易互變乙腈蛋白沉淀提取含量測定指標成分：2005版之前藥典：菝葜皂苷元2010版藥典：芒果苷和知母皂苷B-ⅡHPLC-ELSDHPLC-MS薄層色譜掃描法酶聯(lián)免疫法顯色劑-UVHPLC-ELSD皂苷類成分大多數(shù)無紫外吸收，所以對其皂苷類成分的含量測定，目前報道常用ELSD顯示器和示差折光法測定。蒸發(fā)光散射檢測器是比較好的