高效液相色譜法測(cè)定元胡止痛片中延胡索乙素的含量

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1、高效液相色譜法測(cè)定元胡止痛片中延胡索乙素的含量陳洪寶，李彩榮，楊慶勝，趙雪暉【關(guān)鍵詞】元胡止痛片；,,延胡索乙素；,,高效液相色譜　　摘要：目的建立元胡止痛片中延胡索乙素的含量測(cè)定方法。方法C18ODS色譜柱(4.6mm×250mm,20μm)；流動(dòng)相：甲醇0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH值至6.0）(55∶45)；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；流速：1.0ml?min1。結(jié)果延胡索乙素對(duì)照品在0.1532~0.7660μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積間呈良好的線性關(guān)系，r=0.99999，平均回收率為99.53%。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)

2、果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于控制該制劑的質(zhì)量?！　￡P(guān)鍵詞：元胡止痛片；延胡索乙素；高效液相色譜　　元胡止痛片是2005版《中國(guó)藥典》〔1〕收載品種，由延胡索（醋制）、白芷2味中藥組成。具有理氣、活血、止痛功能，用于氣滯血淤的胃痛、脅痛、頭痛及痛經(jīng)等。是中藥止痛著名方劑?，F(xiàn)代研究表明，延胡索乙素具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜，催眠等藥理作用〔2〕。因此，該成分是元胡止痛片中的有效活性成分之一。2005版《中國(guó)藥典》〔1〕收載的元胡止痛片中延胡索乙素的含量測(cè)定方法為薄層色譜掃描法，操作比較復(fù)雜。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法改進(jìn)延胡索乙素的含量方法，

3、并對(duì)測(cè)定方法學(xué)進(jìn)行了研究。　　1儀器與試劑　　儀器：高效液相色譜儀(日本島津CLASSVP10AVP)；C18ODS色譜柱(4.6mm×250mm,20μm)(大連依利特)；HP1050/3D化學(xué)工作站；樣品：元胡止痛片，自制；對(duì)照品：延胡索乙素對(duì)照品，批號(hào)：110726200208，供含量測(cè)定用（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；試劑：所用試劑均為分析純、色譜純；水為重蒸餾水(自制)?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調(diào)pH值至6.0）(55∶45

4、)為流動(dòng)相；流速1.0ml?min1，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；理論板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。　　2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含46μg的溶液，即得?！　?.3供試品溶液的制備取本品10片，除去糖衣，研細(xì)，取細(xì)粉0.50g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液50ml,稱定重量,冷浸1h后加熱回流1h,放冷,再稱定重量,用濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),精密吸取續(xù)濾液25ml，置水浴上蒸干,殘?jiān)蛹状既芙?轉(zhuǎn)移至5ml量

5、瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得?！　?.4線性關(guān)系考察精密稱取延胡索乙素對(duì)照品3.83mg至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得混合對(duì)照品原液（153.2μg/ml）。精密吸取對(duì)照品原液1，2，3，4，5ml，分別至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進(jìn)樣量(X)對(duì)峰面積(Y)作圖，得到其標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。得回歸方程Y=3.94×107X+0.02751，r=0.99999，n=5。延胡索乙素對(duì)照品在在0.1532~0.7660μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積間呈良

6、好的線性關(guān)系?！　?.5精密度實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確吸取上述對(duì)照品溶液10.0μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積值，重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD為0.42%。結(jié)果表明，本法精密度較好?！　?.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于1，2，3，4，5，6h測(cè)定延胡索乙素的峰面積值，RSD為0.78%，結(jié)果顯示供試品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定?！　?.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)對(duì)同一批樣品平行制備5份供試液,分別取10.0μl，注入液相色譜儀，進(jìn)行含量測(cè)定，RSD為1.96%。表明本法重現(xiàn)性較好?！　?.8陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)取缺延胡索的處方藥材，按工藝制備制成缺延胡索的陰性制劑，照

7、供試品溶液制備方法制成陰性溶液，分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性溶液各10.0μl，注入液相色譜儀，按上述條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，從色譜圖中可以看出，方中其它成分在本測(cè)定條件下，對(duì)延胡索乙素的含量測(cè)定無(wú)干擾。見圖1~3。　　圖1對(duì)照品色譜圖（略）　　圖2樣品色譜圖（略）　　圖3陰性樣品色譜圖（略）　　2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的同一批號(hào)樣品（延胡索乙素含量為0.45mg/g）9份，分為3個(gè)濃度組，稱樣量分別為0.17，0.25，0.32g，每組3份，均精密稱定，3個(gè)濃度組分別精密加入對(duì)照品原液（延胡索乙素含

8、量為0.1532mg/ml）0.9，0.7，0.5ml，按供試品溶液制備方法及上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1?！　?.10供試樣品的含量測(cè)定分別取不同批號(hào)的樣品，按本方法的測(cè)定條件，分別測(cè)定各樣品中延胡索乙素的含量。結(jié)果見表2?！　”?延胡索乙素加樣回收率實(shí)驗(yàn)（略）　　　表23批樣品中延胡