雜色鮑三個(gè)免疫相關(guān)基因克隆及表達(dá)分析

雜色鮑三個(gè)免疫相關(guān)基因克隆及表達(dá)分析

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1、摘要雜色鮑(麒l療D凰d如P坶f∞如力是我國(guó)南方海域水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中重要的經(jīng)濟(jì)貝類(lèi)之一,但自從上世紀(jì)90年代以來(lái),養(yǎng)殖雜色鮑陸續(xù)暴發(fā)大規(guī)模病害,成活率急劇下降,給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重影響了雜色鮑養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。引起雜色鮑大規(guī)模死亡的原因是多方面的,最主要的是養(yǎng)殖環(huán)境惡化、雜色鮑種質(zhì)衰退以及抗病力下降。遺傳改良和培育抗病優(yōu)良品種、開(kāi)發(fā)免疫增強(qiáng)劑等是解決目前雜色鮑養(yǎng)殖業(yè)面臨病害問(wèn)題的必然選擇,而所有這些措施的基礎(chǔ)都有賴于對(duì)雜色鮑免疫防御機(jī)制有深刻的了解。本研究對(duì)雜色鮑天然免疫系統(tǒng)中3個(gè)重要的功能基因進(jìn)行克隆及表達(dá)分析,旨在為深入了解鮑免疫防御分子機(jī)制提供新資料。本研究的主要結(jié)

2、果如下:1.克隆獲得了GABAA受體相關(guān)蛋白(GABAAreceptor-associatedprotein,GABARAP)、表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidemalgrowthfactorreceptor,EGFR)和功能未預(yù)測(cè)受體(Unpredictedreceptor’UPR)3個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA,分別命名為SaGABARAP、SaEGFR和SaUPR。SaGABARAP基因cDNA全長(zhǎng)為963bp,354bp的ORF編碼117個(gè)氨基酸,有一個(gè)自吞噬蛋白At98結(jié)構(gòu)域。SaEGFR基因cDNA全長(zhǎng)為2620bp,2373bp的ORF編碼790個(gè)氨基酸,有兩個(gè)EGF受體L結(jié)構(gòu)域。SaU

3、PR基因cDNA全長(zhǎng)為1779bp,164lbp的OI江編碼546個(gè)氨基酸,有一個(gè)清道夫受體半胱氨酸豐富結(jié)構(gòu)域、兩個(gè)表皮生長(zhǎng)因子結(jié)構(gòu)域和一個(gè)透明帶結(jié)構(gòu)域,推測(cè)可能是個(gè)膜受體。2.克隆獲得了SaGABA凡~P和SaUPR兩個(gè)基因的基因組DNA。SaGABARAP基因組DNA全長(zhǎng)為4352bp,包含3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子。SaUPR基因組DNA全長(zhǎng)為7517bp,包含7個(gè)外顯子和6內(nèi)含子。3.揭示了SaGABARAP、SaEGFR和SaUPR在雜色鮑各組織和胚胎幼體發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況。這三個(gè)基因在檢測(cè)的各組織和胚胎幼體發(fā)育時(shí)期均有表達(dá),而且都在肝胰臟中表達(dá)水平最高,SaGABARAP在原腸胚

4、中的表達(dá)水平最高,SaEGFR和SaUPR在囊胚中的表達(dá)水平最高。所有這些暗示著這三個(gè)基因可能在雜色鮑生命過(guò)程中發(fā)揮著廣泛而重要的作用。4.揭示了雜色鮑在溶藻弧菌感染后血細(xì)胞和肝胰臟中三個(gè)基因的表達(dá)情況?;【腥竞螅琒aGABARAP基因在血細(xì)胞和肝胰臟中的表達(dá)量均發(fā)生顯著提高,SaEGFR基因在血細(xì)胞和肝胰臟中的表達(dá)水平均發(fā)生極顯著提高,而SaUPR基因在血細(xì)胞中的表達(dá)水平發(fā)生顯著提高,但在肝胰臟中并沒(méi)有顯著提高。所有這些暗示著這三個(gè)基因可能在雜色鮑免疫防御體系中發(fā)揮著重要作用,它們表達(dá)量上升對(duì)于鮑機(jī)體清除病原菌感染可能是有益的。關(guān)鍵詞:雜色鮑;SaGABARAP;SaEGFR;SaU

5、PR;免疫防御ⅡAbstractSmaIlabalone脅矗b凰反VP坶fcD,DrisoneofthemostcommercialIyimportantmolluscsforaquacuItureinChinasouthemseaarea.Butsincel990s,abaloneaquaculturchasbeenunde唱oingla唱e-scaIediseaseand10wrateofgro、vthandsurviVal.SoithasbroughtmassiVeeconomiclossest0aquaculture,andseVerelya仃bctedthehealthyand

6、continuabledeVeIopmentofsmallabaloneaquaculture.ThereareseVeralaspectsthattriggersmallabalonemassmonali吼butthemoStimponantaretheworsesuiViValenVironment,smallabalonestraindegenerationanddecliningdiseaseresistance.Therearenecessa叮waystosolVecurrentdiseaseproblemsofsmallabaIoneaquaculture,suchasgen

7、eticimproVementstrain,breedingdisease—resistantabaloneanddeVelopmentimmuni夠boostingagents,butthefoundationofallisdependentonthedeepunderstandingofsmallabaloneimmunedefensemechanism.Thisstudyfocusedoncloningandexpressio

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