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《雜色鮑sod、cat和mpeg基因的克隆與分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、集美大學(xué)碩士學(xué)位論文雜色鮑sod、cat和mpeg基因的克隆與分析姓名：張克烽中請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)指導(dǎo)教師：王藝?yán)?0070622雜色鮑sodcat和mpeg基因的克隆與分析摘要本研究利用KITW術(shù)和啦昉法克隆了雜色鮑抗氧化防御系統(tǒng)相關(guān)基因sodcat?抗病相關(guān)基因mpe毆內(nèi)參標(biāo)基因28SrM進(jìn)而用實(shí)時(shí)定量P0技術(shù)分析了sodca湘mpeg基因在病原菌感染和污染物暴露下的表達(dá)譜。結(jié)果表明：(1)scxg因組EW長含有介外顯子，4f內(nèi)含子，第一個(gè)和第四個(gè)內(nèi)含子遵循規(guī)則。so靠因clW列全長984bRSLW/5bRCRI%465bR3’UH送/514bR可編碼154
2、t氨基酸。同源性分析表明該序列與其它貝類so靠因具有很高的相似性。進(jìn)化分析顯示，雜色鮑sod基因與其它軟體動(dòng)物sex基因占據(jù)進(jìn)化上獨(dú)立的分支，而魚類、哺乳動(dòng)物各集成一支。定量IW析發(fā)現(xiàn)，在副溶血弧菌感染后的第8h24h48附196用寸相，socg因表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異；在7W露下的第2h12h48附1192用寸相中，只有在12h時(shí)相，雜色鮑肝胰腺的s(xg因表達(dá)水平顯著低于與對照組，其余時(shí)相未見變化。(2)獲得了2312bpcat基因的cENQ部分片段。雜色鮑感染副溶血弧菌后，肝胰腺中cat基因表達(dá)水平在第24h顯著低于對照組，在1BT暴露下，肝胰腺中的cat基因表達(dá)水平在第
3、2h顯著低于對照組。(3)免疫相關(guān)基因mpegcENA全長2781bR5’UIR為252bRCPF為2187bR3’UIR為342bp,編碼728個(gè)氨基酸。同源性分析表明，其與粉鮑、紅鮑的mpeg基因具有很高的相似性。進(jìn)化分析顯示，雜色鮑、粉鮑、紅鮑在一個(gè)分支，而小家鼠、褐家鼠和家牛則在另一個(gè)分支，這與生物分類學(xué)中的系統(tǒng)分類親緣關(guān)系結(jié)果一致。在感染副溶血弧菌后的8h和96h,實(shí)驗(yàn)組肝胰腺中的mp礙基因表達(dá)水平極顯著地高于對照組，在1BT暴露下的第2h12h48h192h四個(gè)時(shí)相中，雜色鮑肝胰腺的mpeg基因表達(dá)水平與對照組相比均未見顯著的差異。(切克隆到一個(gè)1389bp的28
4、SrRM因片段，為定量RR的分析奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：雜色鮑，艮廿爲(wèi)購犬定量PCR,sod基因，cat基因，mp礙基因，28SrRNA基因Cloningandanalysisofsod,catandmpeggenefromsmallabaloneHaliotisdiversicolorsupertextaAbstractTwogenesbelongingtotheanti-oxidationdefensesystem,superoxidedismutase(sod)andcatalase(cat),onedisease-resistancerelatedgene,macroph
5、ageexpressedprotein(tnpeg)、andahousekeepinggene,28SrRNAhavebeenclonedfromsmallabaloneHaliotisdiversicolorsupertextabyRT-PCRandRACEinthisproject.Real-timePCRwasusedtoanalyzetheexpressionspectrumsofsod.catandmpeggeneunderpathogenchallengeandpollutantexposure.Theresultsshowedthat:(1)Genomicseq
6、uenceofthesodgenecontainsfiveextronsandfourintrons.ThefirstandthefourthintronobeytheGT-AGrule.ThefulllengthofsodcDNAis984bp.Its5'UTRis5bp,ORFis465bp,andthe3'UTRis514bp.ThiscDNAencodesa154aminoacidsprotein.Homologyanalysisindicatedthatthissequenceishighlysimilartoothershellfishsodgenes.Phylo
7、geneticanalysisdemonstratedthatthesodgeneofH.diversicolorsupertextaclusterswithothermollusksodgenes,andoccupiesanindependentlineagedistinctfromthesodgenesinfishandmammals.ReaktimePCRanalysisrevealsthatafterinfectionbyVibroparahaemolyticusfor8hour,24hour,
