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《略論小鼠樹突狀細胞的體外培養(yǎng)和鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、略論小鼠樹突狀細胞的體外培養(yǎng)和鑒定：田蓉，李巍，于繼云，劉玉峰【樹突細胞 Invitrocultureandcharacterizationofmousespleendendriticcells 【AbstractAIM:Toexploreandoptimizethemethodsforinvitrocultureofmousedendriticcells(DC)thatorphologicallyandidentifiedbiologically.METHODS:Miceg/kgcyclophosph
2、amidethroughthetailvein,andethodsfirstly,and3dlaterconditionalmediumcontainingIL4,GMCSFicroscope,scanningelectronmicroscope,andtransmissionelectronmicroscopeanalysis.Atday3,5,7,cellsarkers.RESULTS:CulturedcellsdisplayedatypicalDCphenotypeinmorphologicalana
3、lysis,andFACSshoarkersasCD11c,CD86,ⅠAb,H2D6.CONCLUSION:UsingofIL4,GMCSF,TNFαasstimulatorsinthemousespleencellculturecanobtainDCakesafoundationforfutureresearchonthebasicandclinicalusageofDC. 【Keyolecule 【目的：探索、優(yōu)化體外誘導(dǎo)和擴增小鼠樹突狀細胞（DC）的方法，并進行形態(tài)學觀察和生物學鑒定.方法：應(yīng)用
4、環(huán)磷酰胺200mg/kg經(jīng)尾靜脈注射Balb/c小鼠，8d后正法小鼠，常規(guī)培養(yǎng)脾細胞，第3日加進含有IL4,GMCSF細胞因子的條件培養(yǎng)液，第5日補加TNFα,第8日制備標本進行相差顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡觀察，并分別在培養(yǎng)第3,5,7日經(jīng)流式細胞儀檢測成熟細胞表面標志.結(jié)果：刺激培養(yǎng)細胞經(jīng)相差顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡觀察，具有典型的DC形態(tài)，流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)細胞表面表達CD11c,CD86,ⅠAb,H2D6標志物.結(jié)論：在小鼠脾臟細胞培養(yǎng)中加進IL4,GMCSF,TNFα等刺激，可獲得足量、較高純度
5、的DC，為DC的基礎(chǔ)探究和臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ). 【樹突細胞；細胞因子；MHCⅡ類分子 0引言 自從Steinman即是1973年發(fā)現(xiàn)樹突狀細胞（dentriticcell,DC）以來［1］，DC作為體內(nèi)最重要的抗原提呈細胞，其強大的提呈抗原功能和啟動初始T細胞的能力，日益引起國內(nèi)外學者的關(guān)注.非凡是DC和腫瘤免疫的密切關(guān)系以及在抗腫瘤方面的獨特功能，使其成為腫瘤免疫探究的一個重要領(lǐng)域.DC于骨髓CD34細胞［2］，獲得一定量有功能的DC是深進探究其生物學功能的關(guān)鍵，然而DC在體內(nèi)分布散在，含量極低，在
6、動物和人外周血中尚不足白細胞總量的1%.目前體外培養(yǎng)DC的方法尚不盡人意，在很大程度上限制了對DC基礎(chǔ)和臨床工作的開展.我們在體外培養(yǎng)擴增了Balb/c小鼠的DC細胞，在培養(yǎng)中添加IL4,GMCSF,TNF等刺激，并通過相差顯微鏡、電鏡觀察和流式細胞儀檢測分析對所培養(yǎng)細胞進行鑒定，為優(yōu)化DC的體外培養(yǎng)方法進行積極的探索. 1材料和方法 1.1材料環(huán)磷酰胺購自上海華聯(lián)公司；熒光標記抗體：CD11cFITC,IAbFITC,H2DbFITC,CD86FITC購自Diaclone公司；rmGMCSF,rmIL
7、4,TNFγ，胎牛血清，DMEM培養(yǎng)基，胰蛋白酶購自美國GIBCOL公司；Hepes，青霉素，鏈霉素購自美國Sigma公司；顛倒相差顯微鏡為日本Olympus公司生產(chǎn)，低速離心機為北京醫(yī)用離心機廠生產(chǎn)，微量臺式高速離心機為德國Heraeus公司生產(chǎn)，流式細胞儀為Coulter公司生產(chǎn)，掃描電鏡、透射電鏡由美國BD公司生產(chǎn)；6~8wk齡雄性Balb/c小鼠購自軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心. 1.2方法 1.2.1DC細胞的分離和培養(yǎng)將環(huán)磷酰胺按200mg/kg體質(zhì)量由小鼠尾靜脈注射，8d后頸椎脫位正法小鼠，
8、750mL/L乙醇浸泡10min，無菌條件下用鑷子取出脾臟移進放在平皿的100鉬鋼X上，剔除脾四周的結(jié)締組織，剪碎、研磨后收集濾過的細胞懸液，離心800r/min,7min，加TrisNH4Cl3mL，溶除紅細胞，獲取細胞懸液，以完全培養(yǎng)基懸浮為1×109/L細胞，37℃，50mL/LCO2孵箱培養(yǎng).3d后，吸棄全部培養(yǎng)基及懸浮細胞，加rmGMCSF/rmIL4條件培養(yǎng)基隔日半量換液，第5d補加細胞因子TNFγ1
