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《內(nèi)皮祖細(xì)胞在股骨頭壞死發(fā)病機(jī)制及治療中的作用研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文材料和方法1．實(shí)驗(yàn)材料與入選對(duì)象1.1主要設(shè)備及器材（1）全自動(dòng)生化分析儀美國(guó)OLYMPUS公司AU2700（2）SysmexXT-1800i全自動(dòng)血細(xì)胞分日本希斯美康公司析儀及其配套試劑（3）激光共聚焦顯微鏡FV-500日本奧林巴斯公司（4）HIRAYAMA高壓滅菌鍋HVE-50日本HIRAYAMA公司（5）渦漩混勻器中外合資深圳天南海北有限公司（6）電子分析天平瑞士MettlerToledo公司（7）Sigma3K30低溫高速離心機(jī)德國(guó)SIGMA公司（8）S2-93自動(dòng)雙重純水蒸餾機(jī)上海亞榮生化
2、儀器廠（9）流式細(xì)胞分析儀美國(guó)BectonDickinson公司（10）倒置相差光學(xué)顯微鏡德國(guó)Wilovert公司（11）冰箱BCD-190三星中國(guó)有限公司（12）二氧化碳培養(yǎng)箱美國(guó)ThermoScientificForma公司（13）超凈工作臺(tái)上海博訊醫(yī)療設(shè)備廠（14）80-2型水浴恒溫箱上海手術(shù)器械廠（15）GZX-9146MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干上海shellgene公司燥箱（16）培養(yǎng)板美國(guó)Corning公司（17）細(xì)胞培養(yǎng)瓶美國(guó)Corning公司（18）注射器美國(guó)BectonDickinson公司（19）EDTA-K
3、2抗凝血管美國(guó)BectonDickinson公司（20）HIRAYAMA高壓滅菌鍋HVE-50日本HIRAYAMA公司5華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文1.1實(shí)驗(yàn)試劑（1）DiI標(biāo)記的乙酰化低密度脂蛋白美國(guó)Vector公司（2）人纖維連接蛋白美國(guó)Chemicon公司（3）血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子英國(guó)Peprotech公司（4）堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子英國(guó)Peprotech公司（5）胎牛血清美國(guó)GIBCO公司（6）FITC標(biāo)記抗CD45抗體美國(guó)BectonDickinson公司（7）PerCP標(biāo)記抗CD34抗體美國(guó)BectonDickinso
4、n公司（8）PE標(biāo)記抗VEGFR2抗體美國(guó)R&D公司（9）同型IgG1-FITC，R-PE美國(guó)BectonDickinson公司（10）FITC標(biāo)記荊豆凝集素I美國(guó)Sigma公司（11）人淋巴細(xì)胞分離液天津?yàn)笊镉邢薰荆?3）4',6二脒基-2-苯吲哚鹽酸（DAPI）美國(guó)Sigma公司（14）細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒上海碧云天生物技術(shù)有限公司（15）培養(yǎng)液：M199培養(yǎng)基（美國(guó)GIBCO公司），含10mM羥乙基哌嗪乙磺酸，0.2%碳酸氫鈉及常規(guī)的雙抗（100u/ml青霉素及100u/ml鏈霉素），pH值調(diào)為7.
5、2~7.4，用塞氏濾器經(jīng)0.22μm雙層濾膜正壓過(guò)濾除菌，分裝后于-20℃保存?zhèn)溆谩Ｓ脮r(shí)加入胎牛血清并使其終濃度為10%。（16）紅細(xì)胞裂解液：碳酸氫鈉（10mmol/L）84mg，EDTA-Na2(0.1mmol/L)3.72mg，NH4Cl802.3mg（150mmol/L）溶入90ml雙蒸水中，以HCl調(diào)節(jié)PH至7.2，再加入三蒸水定容至100ml，塞氏濾器雙層0.22μm濾膜正壓濾過(guò)除菌，分裝后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩＃?7）PBS：Sigma公司。袋裝PBS干粉溶于1L四蒸水中，用塞氏濾器經(jīng)0.22μm雙層濾膜正壓
6、過(guò)濾除菌，分裝后于常溫保存?zhèn)溆?。?8）0.25%胰蛋白酶消化液：稱(chēng)取胰酶0.25g，加入100mlPBS中，攪拌4h冰浴中，調(diào)PH7.4，過(guò)濾、分裝備用。（19）4%多聚甲醛：稱(chēng)取40g多聚甲醛，置于三角燒瓶中，加入800～900ml0.1mol/L6華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文磷酸緩沖液，加熱至60℃左右，持續(xù)磁力攪拌使粉末完全溶解，通常需滴加少許NaOH才能使溶液清亮，最后補(bǔ)足0.1mol/L的磷酸緩沖液于1000ml，充分混勻。1.1入選對(duì)象本研究取得同濟(jì)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)以及所有參與者的知情同意書(shū)。于2007年
7、6月-2008年12月，選擇54例于我院就診的非創(chuàng)傷性的ANFH患者（32例男性，22例女性，24歲-65歲之間，平均年齡44.8歲），隨機(jī)選擇于我院健康體檢的30例年齡匹配的健康人群（17例男性，13例女性，28歲-63歲之間，平均年齡46.7歲）。排除心血管疾病或癌癥及視網(wǎng)膜病變等引起血管新生的患者。在生理周期的女性受試者也排除在外。所有受試者均采用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估，包括體格檢查，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，臨床診斷，以及疾病診療病史的調(diào)查。因此，有明顯髖關(guān)節(jié)直接損傷或類(lèi)似的外傷史的患者均排除在外。ANFH由X-線片或MRI進(jìn)行診斷（
8、Steinberg分期Ⅰ－Ⅳ期）。按照傳統(tǒng)的致病誘因，ANFH患者分為激素誘發(fā)組、酒精誘發(fā)組和自發(fā)組。（表1-1）表1-1入選對(duì)象的一般臨床資料（±s）一般資料HC(n=30)ANFH(n=54)P值年齡（歲）46.7±6.544.8±7.10.163男性病例數(shù)(%)17(56.7)32(59.3)0.
