mir-22在內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老中的作用及機(jī)制研究

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1、萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文Titie：Author：SHANGHAIJIAoToNGUNIVERSITYDOCToRALDISSERTATIONMicroRNA一22InducesEndothelialProgenitorCellSenescencebyTargetingAKT3ZhengYueStudentID：012731936lMentor：Major：Researchfield：Applyfor：Author’SA116iIiation：HongchangLaiPediaricsResearchonthemech

2、nismofMicroRNA．22InducesEndothelialProgenitorCellSenescenceDoctordegreeofPhilosophyShanghaiChildren’SMedicalCenter,Schoolofmedicine，ShanghaiJiaotongUniversityDateofthesisdefence：April．24也，2015Keywords：EPCs；miR一22；senescence；proliferation；migration；angiogenesis；Akt3Apri

3、l2015萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并商匡家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文豹復(fù)印件和電子舨，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃接等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密口，在』解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密留。(請在以上方框內(nèi)打群4掙)學(xué)位論文作者簽名：彳予∞指導(dǎo)教師簽名：一塢彤1日瓤泌，年。月，妒日萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)學(xué)位論文原刨性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文

4、，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明弓l用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個入或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名；么爭鼬日期：哆驢ff年,．t-71I丫日萬方數(shù)據(jù)背景及目的摘要內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelialprogenitorcells，EPCs)是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，廣泛存在于臍帶血、外周血及骨髓中，參與缺血性疾病血管新生和損傷后的血管內(nèi)皮的愈合修復(fù)。當(dāng)血管受到損傷后，EP

5、Cs從骨髓中釋放進(jìn)入外周血中，遷移至損傷部位，然后增殖分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)損傷血管再內(nèi)皮化。已有的大量研究表明，隨著年齡的增長，EPCs數(shù)量減少，其粘附、增殖、遷移和血管形成等功能也隨之衰退。這一結(jié)論表明年齡的增長使EPCs呈現(xiàn)細(xì)胞衰老表型，但其確切的作用機(jī)制仍不清楚。MicroRNAs(miRNAs)是一類長度約為22個核苷酸左右的單鏈內(nèi)源性非編碼小RNA，廣泛存在于動物及植物中。mlRNAs臟～夠通過與其靶基因的3’端非編碼區(qū)(37untranslatedregion，UTR)進(jìn)行完全或不完全互補配對的方式直接降解其靶基因或

6、者對其靶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，從而參與細(xì)胞存活、衰老、增殖、分化、遷移等重要的細(xì)胞生理過程。miRNAs的異常表達(dá)與多種疾病如心血管疾病等密切有關(guān)，而心血管疾病與EPCs又有著密切的關(guān)系。近年來，EPCs的衰老與miRNAs的關(guān)系受到人們的重點關(guān)注，女NZhao及其同事報道m(xù)iR一34a通過抑制沉默信息調(diào)控子1(Sirtl)的表達(dá)，加速EPCs的衰老，并降低細(xì)胞血管形成能力。Zhu課題組研究發(fā)現(xiàn)miR．10a和miR．21通過靶Ifi-JHmga2來調(diào)節(jié)小鼠EPCs的衰老、遷移、增殖、自我更新和體內(nèi)外血管形成能力；該研究的芯片結(jié)果也顯

7、示miR一22在小鼠老年組中表達(dá)量要高于小鼠年輕組。那么，miR一22在人老年組中是否也是高表達(dá)?miR．22是否在EPCs衰老過程中發(fā)揮生物學(xué)作用呢?為了解決這些問題，我們首先設(shè)置了年輕組(21歲左右)和老年組(66歲左右)兩組樣本，分離出EPCs，然后采用多種研究方法來研究miR一22對EPCs的細(xì)胞衰老、增殖、遷移和血管形成的影響。通過預(yù)測軟件的預(yù)測和生物信息學(xué)分析，推測Akt3可能是miR-22的潛在靶基因，最后采用各種實驗方法探討Akt3與miR一22之間的關(guān)系，從而來闡明miR一22對EPCs衰老的作用機(jī)制。萬方數(shù)據(jù)方法

8、(1)本研究設(shè)置兩組樣本，一組是年輕組(21歲左右)，一組是(66歲左右)，每組各3個樣本，采取其外周血，然后采用密度梯度離心法(淋巴分離液FicoU)來分離外周血，獲得單個核細(xì)胞，最后運用貼壁分離法獲得較純的EPCs。(2)采用Di