沙苑子黃酮對mcf

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1、沙苑子黃酮對MCF：韋翠萍，王建梅，顧振綸【摘要】　　目的研究沙苑子總黃酮(FAC)對人乳腺癌細胞MCF-7的增殖抑制作用、誘導(dǎo)凋亡作用以及其對NF-кB表達作用影響。方法以不同濃度(0.5，0.25，0.125，0.0625mg/ml)處理MCF-7細胞6，12，24，48，72h后，SRB法測定細胞增殖抑制；FITC-AnnexinⅤ/PI雙染法檢測凋亡率變化；用CF-7細胞增殖抑制作用與對照組相比差異具有顯著性（P<0.01）；0.0625mg/ml作用48，72h后以及0.125mg/ml作用24h后對MCF-7的增殖抑制

2、作用與對照組相比也有差異性（P<0.05）。FITC-AnnexinⅤ/PI雙染法FCM（floetry）檢測顯示，不同濃度沙苑子黃酮(0.5，0.25，0.125，0.0625mg/ml)作用72h后，MCF-7細胞早期凋亡率分別為71.46%，60.34%，51.27%，46.83%,晚期凋亡率分別為4.12%，3.27%，2.59%，1.26%。與對照組比較0.5，0.25，0.125mg/ml組早、晚期凋亡率差異具有顯著性（P﹤0.01），0.0625mg/ml組的早、晚期凋亡率也有差異性（P﹤0.05），0.5mg/ml

3、劑量組的早、晚期凋亡率與5-Fu組比較差異無顯著性（P﹥0.05）。CF-7具有增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡作用；其作用可能與其下調(diào)NF-кB表達有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】沙苑子總黃酮；MCF-7；NF-кB；5-Fu；凋亡乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，初氏［1］與石氏［2］對北京西城區(qū)近四年的居民疾病死因分析顯示，居民死亡的第1位原因是惡性腫瘤，而乳腺癌居女性惡性腫瘤死亡原因的第3位。上海地區(qū)2002～2005年乳腺腫瘤是第1位死因（上海市疾病控制中心統(tǒng)計）。乳腺癌與其他惡性腫瘤一樣，藥物治療不良反應(yīng)比較嚴(yán)重，甚至有些癌癥病人最后死于藥物的不良反應(yīng)而

4、不是疾病本身。因此，尋找一種對乳腺癌有效，而不良反應(yīng)比較小的藥物是十分有意義的。中醫(yī)中藥是世界醫(yī)藥寶庫中的瑰寶，有很多值得我們探討研究，也是藥物開發(fā)的不竭的寶庫。前期研究顯示，沙苑子黃酮對S180荷瘤小鼠以及H22荷瘤小鼠的腫瘤均有增殖抑制作用［3，4］。本文用SRB法研究MCF-7對沙苑子黃酮的敏感性；FITC-AnnexinⅤ/PI雙染法FCM（floetry）法研究沙苑子黃酮對MCF-7誘導(dǎo)凋亡作用；用I1640培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基，Gibco產(chǎn)品；超級新生小牛血清（FBS），杭州四季青生物工程材料研究所生產(chǎn)。PMI1640培養(yǎng)基

5、稀釋成濃度為以0.5mg/ml，4℃保存?zhèn)溆??！　?.2細胞株人乳腺癌細胞株MCF-7，購于中科院上海細胞生物研究所(中國上海)?！　?.3其它試劑FITC-AnnexinⅤ/PI雙染試劑盒(Medsystems,Austria)；兔抗NF-κBp65多克隆抗體、批號為J119，購自SantaCruz公司；Biotinylated兔抗羊IgG自北京中山生購物技術(shù)有限公司；胰酶，AMRESO產(chǎn)品；胰島素，上海第一生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；SRB（美國，Sigma公司）,上海化學(xué)試制公司進口分裝、L-谷氨酸（L-Glu）、碘化丙啶（PI），Si

6、gma產(chǎn)品；十二烷基磺酸鈉（SDS），上海化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。　　1.4儀器　　CO2孵箱，Napco5410型，美國Napco公司；倒置顯微鏡，XD-20型，重慶光學(xué)儀器廠產(chǎn)品；酶聯(lián)免疫檢測儀，DG3002型，國營華東電子管廠產(chǎn)品；流式細胞儀（德國Zeis公司）；電熱恒溫水浴鍋，H.H.S型，上海醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；光柵分光光度計，722型，江蘇科達智能儀器廠產(chǎn)品?！　?方法　　2.1細胞培養(yǎng)用含10%FBS、200U/L胰島素的MEM培養(yǎng)液（另加Glu0.03％，hepes0.06％，NaHCO30.2%）于37℃、

7、5%CO2條件下培養(yǎng)，3d傳代。取對數(shù)生長期細胞進行實驗。以1×106/ml的細胞濃度，分別接種于含F(xiàn)AC濃度為0.5，0.25，0.125，0.0625mg/ml的RPMI1640培養(yǎng)體系中,置于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)，24h后收集細胞，以1×PBS洗滌2次并重懸細胞,備用?！　?.2SRB法測定細胞活力［5，6］取生長期MCF-7細胞接種于96孔培養(yǎng)板中，調(diào)整細胞濃度為4×105/孔（100μl）,次日進行分組。實驗組分為不同濃度（0.5，0.25，0.125，0.0625mg/ml）FAC，陰性對照組加入等體積培養(yǎng)液,陽性對

8、照組加5-Fu，每組均設(shè)4個平行孔。分別置37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)培養(yǎng)，分別于6，12，24，48，72h后每孔加入預(yù)冷的80%三氯醋酸（TCA）50μl使TCA終濃度為10%，固定0.5h,加TCA時