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1、針灸血清”對乳腺癌MCF論文李巖郭剛李彬史秀芳【摘要】目的：觀察針灸對乳腺癌細胞凋亡及細胞周期的影響。方法：針灸刺激雌性CF7細胞混合培養(yǎng)，分為電針組、艾灸組和對照組。MTT法檢測細胞生長情況，72h后流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡率及Fas表達率。結(jié)果：MCF7細胞Fas表達率明顯增高，72h達57.70%；MCF7細胞生長受到明顯抑制，12h、24h、72h抑制率分別達17.55%、24.71%和31.85%；作用72h后的細胞凋亡率分別為1.07%、8.72%、10.18%,與艾灸組相近，均明顯高于對照組（P＜0.05）。
2、結(jié)論：“針灸血清”作用于MCF7細胞可能通過增加Fas的表達率來誘導細胞凋亡?！娟P(guān)鍵詞】針刺灸法乳腺腫瘤細胞凋亡細胞周期TheeffectofacupuncturalandmoxibustionaltherapyontheapoptosisofbreastcellMCF7【ABSTRACT】Objective:ToobservetheeffectontheapoptosisofbreastcancercellMCF7oxibustionaltherapy.Methods:ZusanliandSanyinjiaoneigua
3、ninbothsidesoffemaleCF7cell.Todetectethecytoxicityetryafter72hours.Results:TheFasexpressionarkably.Theinhibitionratearkablyhigherthanthecontrolgroup(P＜0.05).Conclusion:AcupuncturalandmoxibustionalserumcouldincreaseFasexpressionratetoinhibitproliferationofMCF7cella
4、ndinduceitsapoptosis.【KEYoxibustionBreastNeoplasmsApoptosisCellcycle乳腺癌在我國的發(fā)病率不斷增高，尋找有效的治療方法具有深遠的意義［1］。針灸在一定程度上能抑制腫瘤的生長.freelingen公司產(chǎn)品，由北京岳泰生物公司提供。FACScan型流式細胞儀為美國BD公司產(chǎn)品。1.2方法1.2.1針灸血清的制備［1］選用雌性健康ODELD68051型電針治療儀，選用連續(xù)波，留針20min。艾灸組用雀琢灸法灸穴位20min，連續(xù)6d，每天2次，在最后一次治療結(jié)束后
5、1h，乙醚吸入麻醉，腹主動脈取血，無菌分離血清，經(jīng)56℃、30min滅活處理后，置-20℃冰箱備用。1.2.2細胞培養(yǎng)MCF7細胞株培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)液中，置37℃，5%CO2（體積比，下同）和飽和濕度下的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2~3d胰酶消化傳代1次，當細胞傳至第4代、細胞生長良好、狀態(tài)穩(wěn)定時，用胰蛋白酶消化后，以2×105/cm2的密度重新種入30mm的6孔培養(yǎng)皿上，于37℃和5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。第2天用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）將細胞清洗2次，分別加入正常鼠血清、電針鼠血清、電針鼠血清繼續(xù)培養(yǎng)72h。1.2.
6、3MTT法檢測MCF7細胞抑制率取對數(shù)生長期的MCF7細胞，胰酶分散計數(shù)，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為1×105/ml，按每孔200μl接種于96孔板中（每孔細胞數(shù)為2×104個），置于37℃、5%CO2和飽和濕度下的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24d，貼壁后倒掉RPMI1640培養(yǎng)液，分為對照組和實驗組，每一組設(shè)3個平行孔，分組如下：對照組（RPMI1640培養(yǎng)液中含10%正常鼠血清），電針組（RPMI1640培養(yǎng)液中含10%電針鼠血清），艾灸組（RPMI1640培養(yǎng)液中含10%艾灸鼠血清）。每一組分別加入血清200μl，再置
7、培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)12h、48h、72h后，每孔加入5mg/mlMTT20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，終止培養(yǎng)。小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入二甲基亞砜150μl，振蕩至結(jié)晶完全溶解，于酶聯(lián)免疫檢測儀上測定490nm波長的吸光度（A值），計算抑制率，由抑制率說明針灸血清對人乳腺癌MCF7細胞株的敏感性。抑制率（%）=（對照組A值-含藥血清組A值）/對照組A值×100%。1.2.4流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期變化取對數(shù)生長期的細胞，用0.25%胰酶消化經(jīng)加入以上各組血清培養(yǎng)72h后的貼壁細胞，收集細胞數(shù)目分別約5×105，10
8、00r/min離心5min，棄去培養(yǎng)液。經(jīng)PBS漂洗2次后，加入冰預冷的70%乙醇固定，4℃過夜。然后除去固定液，用3mlPBS溶液重懸細胞5min，1000r/min離心5min，棄去PBS溶液，加入PC緩沖液50μl，靜置20min，再加入100μg/mlPI液10μl，PBS溶液480μl，室溫避
