乙型肝炎患者外周血單個核細胞中hbv

《乙型肝炎患者外周血單個核細胞中hbv》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。

1、乙型肝炎患者外周血單個核細胞中HBV：張平，曹寧芬，袁迎春，張栩，李玉芳，焦運，【摘要】：目的研究HBV感染者血清及外周血單個核細胞（PBMC）中HBV-DNA的感染情況。方法采用熒光定量PCR技術(shù)對112例乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的感染情況進行檢測。結(jié)果PBMC內(nèi)HBV-DNA陽性60例，陰性52例；PBMC內(nèi)HBV-DNA陽性患者HBeAg陽性率68.3%，較PBMC內(nèi)HBV-DNA陰性患者顯著增高（P＜0.05）；血清和PBMC檢測結(jié)果一致的患者占總檢出率的79.5%。肝硬化組P

2、BMC內(nèi)HBV-DNA陽性率高于急性乙型肝炎組和慢性肝炎組（P＜0.05）。結(jié)論血清與PBMC內(nèi)HBV-DNA陽性率以及HBeAg陽性率存在明顯的相關(guān)性。PBMC中HBV-DNA的持續(xù)存在可能與乙肝易慢性化有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】乙肝病毒；肝硬化；HBV-DNA；外周血單個核細胞　　Abstract：ObjectiveToexploretherelationshipbetandPeripheralBlood.MononuclearCells(PBMC)inHBVpatients.MethodsHBVinfe

3、ctioninserumandPBMCeresultinboth.serumandPBMCoccurredin79.5%ofallcases.PBMCinfectionrateinliver.sclerosispatientsongtheHBV-DNApositiveratesinserumandPBMCandthepositiverateofHBeAg.ThecontinuousexistenceofHBV-DNAinPBMCofHBVpatientsmayplayasignificantrole

4、inthediseasemechanism.　　Key）、凈化公司超凈工作臺、北京醫(yī)用離心機廠低速離心機、日本日立公司SANYO型低溫冰箱、美國貝克曼自動生化分析儀。TagDNA聚合酶購自晶美生物制品公司，熒光定量試劑盒購自深圳達安基因公司。　　1．3外周血PBMC內(nèi)HBV-DNA檢測(單個核細胞HBV-DNA)　　無菌采集空腹靜脈全血5mL放入含EDTA2Na抗凝試管中，常規(guī)Ficoll梯度離心法分離外周血單個核細胞。為排除血清污染、最后一次洗滌液留送PCR法檢測HBV-DNA。離心10000r/

5、min，留取沉淀物，-20℃保存，PBMC沉淀和末次洗滌液分別加入50μLDNA提取液混勻，100℃沸水浴10min，轉(zhuǎn)至4℃靜置6～8h，離心5min，取上清液5μL做PCR反應(yīng)。　　1.4血清HBV-DNA檢測　　參照試劑盒說明書進行。直接吸取血清50μL，加等量的DNA提取液混勻，100℃沸水浴10min，轉(zhuǎn)至4℃靜置6～8h，離心5min，取上清液5μL做PCR反應(yīng)。　　2結(jié)果　　2.1乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的檢測結(jié)果　　見表1。血清和PBMC檢測結(jié)果一致的患者占79.5%（

6、89/112）。隨著病情加重，由急性肝炎→慢性肝炎→肝硬化患者血清內(nèi)HBV-DNA陰性而PBMC內(nèi)HBV-DNA陽性所占的比例有上升趨勢。表1各型乙肝患者血清中與PBMC中HBV-DNA檢出情況(略)　　3討論乙肝病毒是嗜肝性的、非肝細胞毒性病毒。HBV-DNA［2］存在于HBV感染肝細胞內(nèi)，其次是外周血單個核細胞。本實驗運用熒光定量PCR技術(shù)檢測了各型乙型肝炎患者血清和外周血單個核細胞中HBV-DNA的水平。表1所示各組乙肝患者其血清和PBMC中HBV-DNA檢測一致的達79.5%，即PBMC和血

7、清中HBV-DNA變化呈一致性趨勢，說明血清和PBMC中HBV-DNA陽性率有相關(guān)性，與有關(guān)報道一致［3］。隨著病情加重（由急性肝炎→慢性肝炎→肝硬化）患者血清內(nèi)HBV-DNA陰性而PBMC內(nèi)HBV-DNA陽性所占的比例有上升趨勢，肝硬化組達36.1%，這可能與HBV長期存在于PBMC和肝細胞中增加了HBV整合的機會有關(guān)。HBV-DNA可能是肝病患者發(fā)生肝硬化的高危因素［4］，故檢測PBMC內(nèi)HBV-DNA是對血清HBV-DNA的一個重要補充?！　∫话阏J為血清HBV-DNA和HBeAg是病毒復制的指

8、標。HBeAg持續(xù)陽性表明存在HBV活動性復制。而部分患者由于HBV前C區(qū)基因變異，導致不能形成HBeAg。由表2所示112例乙型肝炎患者PBMC內(nèi)HBV-DNA陽性60例、陰性52例，PBMC內(nèi)HBV-DNA陽性患者HBeAg(+)陽性率68.3%，較PBMC內(nèi)HBV-DNA陰性患者顯著增高，說明血清HBeAg陽性可反映HBV在細胞內(nèi)活躍性復制。但有學者［5］發(fā)現(xiàn)一些血清HBV標志物陰性的患者在其外周血PBMC中或肝組織中可檢測到HBV-DNA，可能與上述變異有關(guān)。