桑葉活性多糖調(diào)整小鼠腸道菌群失調(diào)的研究

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1、桑葉活性多糖調(diào)整小鼠腸道菌群失調(diào)的研究王菱枝趙駿（通訊作者）黃燦葉方圓張霞（天津中醫(yī)藥大學300193）【中圖分類號】R378.2【文獻標識碼】A【文章編號】1672-5085（2013）1-0041-03【摘要】目的研究桑葉活性多糖調(diào)整小鼠腸道菌群失調(diào)的作用。方法利用氣相色譜法檢測分析腸道菌群失調(diào)小鼠的腸道菌群代謝物中短鏈脂肪酸的變化,通過鹽酸林可霉素造成小鼠腸道菌群失調(diào)模型，給予多糖進行治療，對小鼠的新鮮糞便進行分析。結果模型組，短鏈脂肪酸含量顯著降低，經(jīng)多糖治療后，腸道菌群恢復平衡，短鏈脂肪酸的含量上升。結論桑葉活性多糖能有效地調(diào)控腸道菌群失調(diào)?！娟P鍵詞】桑

2、葉活性多糖腸道菌群短鏈脂肪酸腸道菌群不僅參與腸道的感覺運動功能，而且通過腸道運動清除腸腔內(nèi)多余的細菌來控制腸道微生態(tài)。正常情況下，腸道菌群和宿主、外界環(huán)境建立起一個動態(tài)的生態(tài)平衡，對人體的健康起著重要作用，任何打破其內(nèi)外環(huán)境的舉措都可導致菌群的失調(diào)，表現(xiàn)為腸道菌群的種類、數(shù)量、比例、定位和代謝特征的變化。短鏈脂肪酸（SCFA）為腸道菌群發(fā)酵的產(chǎn)物，即為腸道代謝物。其中乙酸、丙酸和丁酸含量最高，腸道代謝物是生命過程中發(fā)生的生物化學反應的產(chǎn)物，能夠從某種程度上反映生命過程的木質(zhì)。由于機體的病理變化，代謝產(chǎn)物也產(chǎn)生了某種相應的變化,對這些由疾病引起的代謝產(chǎn)物進行相應的分

3、析，能夠幫助人們更好地理解病變過程及機體內(nèi)物質(zhì)的代謝途徑。木實驗通過分析腸道菌群失調(diào)的小鼠的新鮮糞便中腸道代謝物（短鏈脂肪酸）變化來研宄桑葉活性多糖具有調(diào)控小鼠腸道菌群失調(diào)的作用。一、材料1.實驗材料昆明種全雄小鼠45只，體重20-25g,購于解放軍第四研究所；乙酸、丙酸、正丁酸標品；天津市光復精細化工研究所；鹽酸林可霉素，天津金耀氨基酸有限公司；乳酶生，桂林南藥股份有限公司。2.主要的儀器設備氣相色譜儀GC6820，日本島津；電子分析天平，上海天平儀器廠；臺式離心機，北京醫(yī)用離心機廠；渦旋混勻機，其林W爾儀器制造公司。1.主要的試劑及溶液的配制(1)標準品的配制

4、用移液槍取20ul的標準品乙酸、丙酸、丁酸分別置于25mL容量瓶中，加乙醚定容，及制標準品溶液。(2)多糖溶液和乳酶生混懸液的配制精密稱取重均分子量為11.7±0.5×104多糖粉末4mg，乳酶生粉末3.25mg,分別加0.6mL生理鹽水，得濃度為6.667mg/mL的多糖溶液。和濃度為5.417mg/mL的乳酶生混懸液。二、實驗方法1.鹽酸林可霉素誘導小鼠腸道菌群失調(diào)模型的建立動物采用隨機分組方式，正常組6只，造模組38只。造模組以0.30g/ml鹽酸林可霉素灌胃，每次0.6ml,每日兩次，連續(xù)3天。2.多糖對鹽酸林可霉素引起的腸道菌群

5、失調(diào)小鼠進行治療將造模成功的30只小鼠隨機分組三組，多糖組，陽性對照組(乳酶生組)，陰性對照組多糖組：桑葉多糖溶液0.6mL，陽性對照組：乳酶生混懸液0.6mL,每天2次，治療7天，陰性對照組、正常對照組自行飲水，治療期間檢測小鼠糞便中短鏈脂肪酸一一乙酸、丙酸、丁酸的含量變化；不斷觀察小鼠的精神狀態(tài)的變化，飲食變化，以及體重的變化。3.短鏈脂肪酸的測定(1)樣品的處理稱取小鼠糞便0.5g左右置于10mL離心管中，用8mL溫水(34°C)溶解，溶解后維持水溫浸提15min,之后用渦旋機渦旋15min,然后6000轉(zhuǎn)/分離心20min,取上清液用于乙醚萃取，萃

6、取分3次進行，且乙醚的萃取量分別為3mL、3mL、2mL,集中乙醚層在水浴鍋(36°C)上濃縮至0.5mL左右，所得濃縮液過微孔濾膜后取lul注入氣相色譜儀中，進行分析.(1)氣相色譜條件色譜系統(tǒng)：島津GC-6820;色譜柱：毛細管柱：30m×0.25mm×0.25um柱溫：程序升溫，初始溫度60°C,以20°C/min速率升到190°C,保持3min進樣口溫度:220°C；檢測器溫度:250°C；進樣量：lul。(2)短鏈脂肪酸的含量測定采用外標點法進行含量測定。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件

7、進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，結果以平均值±標準差表示，并采用獨立樣本t檢驗；P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。三、試驗結果1.鹽酸林可霉素誘導小鼠腸道菌群失調(diào)模型的建立⑴小鼠表現(xiàn)特征觀察模型組：攝食攝水量下降，體重減輕；大便無太大變化；背毛失去光澤；精神狀態(tài)下降，不愛活動；易冷，蜷縮于籠中。體重均相應有所下降。正常組：攝食飲水正常，精神狀態(tài)良好，好動活躍。(2)短鏈脂肪酸的含量變化表1正常組與模型組短鏈脂肪酸含量檢測結果(C:mg/mL,平均值±標準差)。(3)正常組與模型組氣相色譜圖2.桑葉多糖對鹽

8、酸林可霉素