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1、青蒿琥酯配伍螺旋藻多糖抗肝癌SMMC-7721細(xì)胞活性作用探究【摘要】目的：研究青蒿璩S旨(artesunate,ART)配伍螺旋藻多糖(polysacchridefromspriulina,PSP)對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞株的抑制作用。方法：MTT法分別測(cè)定ART、PSP、ART與PSP配伍對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用，ELISA方法研究凋亡蛋白Caspase-3的活性。結(jié)果：ART在體外可明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞的增殖，在24h、48h、72h的IC50值分別為45.2Pg/ml、34.7ug/ml、
2、22.1ug/ml；PSP對(duì)腫瘤SMMC-7721的抑制作用稍弱，在24h、48h,72h的IC50分別為157.4g/ml、140.3g/ml、110.0ug/ml；當(dāng)ART(12.5ug/ml,25.0ug/ml>50.0ug/ml)與PSP(90ug/ml)配伍使用時(shí)，顯示出較強(qiáng)的抗瘤作用；ART與PSP配伍作用細(xì)胞后，ELISA方法檢測(cè)到酶Caspase-3的活性增強(qiáng)。結(jié)論：ART與PSP配伍使用時(shí)對(duì)肝癌S麗C-7721細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，其作用途徑可能是通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。【關(guān)鍵詞】青蒿琥酯；螺旋藻多糖；
3、抗腫瘤分類號(hào)R735.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼B文章編號(hào)1674-6805(2013)34-0142-02青蒿境釀是青蒿素（artemisinin）的一種重要衍生物，近年來(lái)就其在抗腫瘤方面的研究是一熱點(diǎn)［1-4］。在前期對(duì)青蒿琥酯和螺旋藻多糖單體分別研究的基礎(chǔ)上，觀察青蒿琥酯配伍螺旋藻多糖對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。1材料1.1藥品與試劑青蒿琥酯購(gòu)于桂林制藥廠，螺旋藻多糖購(gòu)于廣西北海綠A螺旋藻公司（進(jìn)一步純化由廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心賈曉棟講師完成，純度迗92.05%）,S麗C-7721細(xì)胞株購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)，RP
4、MI-1640培養(yǎng)液（美國(guó)Gibco公司），小牛血清（杭州四季青生物公司），四唑鹽（MTT）購(gòu)自Sigma公司，Caspase-3檢測(cè)試劑盒購(gòu)于碧云天生物技術(shù)研究所。1.2實(shí)驗(yàn)儀器全自動(dòng)C02孵箱（ThermoFormo），倒置顯微鏡（日產(chǎn)），酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（Bio-Rad公司）。2方法2.1細(xì)胞培養(yǎng)SMMC-7721置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，37°C、5%C02條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至約80%密度時(shí)，用0.25%胰蛋白酶消化傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。2.2ART對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SM
5、MC-7721細(xì)胞，按每孔細(xì)胞（3?5）X103個(gè)，190Pl接種于96孔培養(yǎng)板中，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，待細(xì)胞貼壁后加入各組藥物，ART終濃度梯度為25yg/ml、50ug/ml、100ug/ml，37°C、5%C02飽和濕度下培養(yǎng)24h、48h、72h，0D值測(cè)量波長(zhǎng)為雙波長(zhǎng)570/630nm,以下列公式計(jì)算抑制率：抑制率=（1-加藥組0D/對(duì)照組OD）X100%。2.3PSP對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率方法同2.2，PSP終濃度分別為45Pg/ml、90ug/ml、180yg/ml作用腫瘤細(xì)胞24h、48h、72h后計(jì)算抑制率。2.4
6、ART與PSP配伍使用對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率方法同2.2，將ART終濃度分別為12.5Pg/ml、25.0Pg/ml、50.0yg/ml與PSP濃度為90ug/ml配伍作用腫瘤細(xì)胞48h、72h后計(jì)算抑制率。2.5Caspase-3活性的研究ART與PSP配伍作用SMMC-7721細(xì)胞48h后收集細(xì)胞，每2X106個(gè)細(xì)胞的比例加100ul裂解液、冰浴、離心，收集上清，測(cè)試各樣品孔中0D值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得相應(yīng)樣品孔中Caspase-3活性。3結(jié)果2.1ART對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的抑制率和IC50值A(chǔ)RT不同濃度對(duì)細(xì)胞的抑
7、制率得出后，用Bliss法計(jì)算出ART作用24h、48h、72h的IC50分別為45.2ug/ml、34.7ug/ml、22.1pg/ml。見(jiàn)表1。3.2PSP對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的抑制率和IC50值PSP不同濃度對(duì)細(xì)胞的抑制率得出后，用Bliss法計(jì)算出PSP作用24h、48h、72h的IC50分別為157.4ug/ml、140.3yg/ml、110.0yg/mlo見(jiàn)表2。3.3ART與PSP聯(lián)合使用ART與PSP配伍作用腫瘤細(xì)胞48h、72h后，12.5ug/ml、25.0ug/ml的ART與90.0ug/ml的PS
8、P對(duì)腫瘤SSMC-7721細(xì)胞的抑制率最高可達(dá)75.0%,配伍使用顯示出很好的抗瘤效應(yīng)。見(jiàn)表3。3.4Caspase-3活性變化ART與PSP聯(lián)合作用于SMMC-7721細(xì)胞48h后，根據(jù)0D值由擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得相應(yīng)樣品空中Caspase_3的濃度(48h)。與空白組比較，配伍作用細(xì)胞4
