青蒿琥酯對(duì)人肝癌hepg

《青蒿琥酯對(duì)人肝癌hepg》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、青蒿琥酯對(duì)人肝癌HEPG【關(guān)鍵詞】青蒿琥酯HEPG-2　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofartesunate(Art)onHEPG-2cellsinvitro.MethodsCellculture,MTTedtoobservetheproliferationofArt,biningl）couldinhibitHEPG-2cellproliferationinatime-dosedependentmannerandIC50lin24h,48h,72hrespectively.K3酶標(biāo)儀?！　?.2試劑　　　　RPMI-1

2、640培養(yǎng)液(美國(guó)Gibco公司)；小牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；四唑鹽(MTT)，二甲基亞砜(DMSO)均購(gòu)自Sigma公司；Art購(gòu)于桂林制藥廠；5-FU購(gòu)于廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科；硫酸亞鐵為分析純。　　1.3細(xì)胞株和細(xì)胞培養(yǎng)人肝癌HEPG-2細(xì)胞株從廣西醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院細(xì)胞室引進(jìn)，培養(yǎng)在含10%小牛血清，含青鏈霉素各100u/ml的RPMI-1640培養(yǎng)液中，37℃，5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)，0.25%胰蛋白酶消化傳代。　　2方法　　2.1MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性、青蒿琥酯IC50值的測(cè)定采用MTT法，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HEPG-

3、2細(xì)胞，按每孔細(xì)胞3×103～5×103個(gè)，190μl接種于96孔培養(yǎng)板中，每組設(shè)6個(gè)復(fù)空，12h貼壁后加入各組藥物，藥物終濃度梯度為200，100，50μg/ml，37℃，5%CO2飽和濕度下培養(yǎng)24，48，72h，OD值測(cè)量波長(zhǎng)為雙波長(zhǎng)570nm/630nm，以下列公式計(jì)算抑制率：抑制率（%）=(1-加藥組OD/對(duì)照組OD)×100%，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次?！　?.2Art與鐵劑硫酸亞鐵作用的研究取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HEPG-2細(xì)胞，按每孔細(xì)胞3×103～5×103個(gè)，180μl接種于96孔培養(yǎng)板中，設(shè)置陰性組，Art組，Art與1，2μg/ml鐵劑聯(lián)合作用組，細(xì)胞12

4、h貼壁后加入各濃度Art，以及終濃度分別為1，2μg/ml的鐵劑，檢測(cè)方法同上。　　2.3與抗癌藥的協(xié)同作用研究取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HEPG-2細(xì)胞，按每孔細(xì)胞3×103～5×103個(gè)，180μl接種于96孔培養(yǎng)板中，，設(shè)陰性組，5-Fu組，5-Fu與10，20μg/mlArt聯(lián)合用藥組,12h貼壁后加入各組藥物，檢測(cè)方法方法同上?！　?.2與硫酸亞鐵聯(lián)用結(jié)果Art終濃度為50，100，200μg/ml，分別與硫酸亞鐵終濃度為1，2μg/ml聯(lián)合作用，各聯(lián)合組抑制率與單用Art組抑制率之間比較，P>0.05，沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表2。表2Art與硫酸亞鐵聯(lián)用

5、的抑制率(略)　　3.3與5-Fu聯(lián)用結(jié)果Art終濃度為10，20μg/ml與5-Fu終濃度為2.5，5，10，20μg/ml聯(lián)合作用，在5-Fu5μg/ml時(shí)加入Art10μg/ml或20μg/ml，與單用5-Fu比較，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表3。表3Art與5-FU聯(lián)用的抑制率(略)　　4討論　　Mosmann(1983)首先報(bào)道用MTT方法檢測(cè)細(xì)胞活性，此方法簡(jiǎn)便、快速，所需細(xì)胞較少，目前已廣泛用于臨床前抗癌藥物篩選研究［3］。本實(shí)驗(yàn)采用MTT法,求出Art各濃度對(duì)人肝癌細(xì)胞系HEPG-2的抑制率，且最高抑制率近80%，并有明顯的時(shí)間－劑

6、量效應(yīng)，采用Bliss法求得Art對(duì)肝癌HEPG-2的24，48，72h的IC50分別為(103.1±8.6)，(75.3±4.1)，(65.7±6.0)μg/ml?！　⊙芯空J(rèn)為，青蒿素衍生物對(duì)腫瘤的細(xì)胞毒作用與其抗瘧作用機(jī)理相似，由于瘧原蟲(chóng)與腫瘤細(xì)胞具有一個(gè)共同特點(diǎn)：高鐵濃度。而青蒿素結(jié)構(gòu)中擁有獨(dú)特過(guò)氧橋結(jié)構(gòu)，且過(guò)氧橋結(jié)構(gòu)為其藥理活性所必須。實(shí)驗(yàn)證明，青蒿素類藥物是在鐵元素介導(dǎo)下，分子內(nèi)過(guò)氧橋裂解產(chǎn)生活性自由基發(fā)揮作用，損傷機(jī)體細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和烷化生物大分子，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，且其作用與細(xì)胞內(nèi)鐵離子水平成正相關(guān)［4］，如果使用全鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白可顯著提高癌細(xì)胞內(nèi)的Fe

7、2+更可以增加ART的抗腫瘤作用［5］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)添加硫酸亞鐵，其終濃度分別為1，2μg/ml未見(jiàn)提高Art對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用，其原因可能是對(duì)腫瘤細(xì)胞有一定的選擇性?！　鹘y(tǒng)的抗癌藥如5-Fu，環(huán)磷酰胺，阿霉素等毒副作用較大，且有不同程度的致突變毒性，病人常難以承受。因此，人們把目光轉(zhuǎn)向中藥，試圖從天然植物成分中尋找毒副作用小，作用獨(dú)特的抗癌藥物。而Art具有化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特，抗癌效果顯著，毒副作用低，且不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，因而與現(xiàn)有化療藥物聯(lián)合使用，可能會(huì)取長(zhǎng)補(bǔ)短，減毒增效，并提高腫瘤治療的特異性。本實(shí)驗(yàn)對(duì)Art與5-Fu按不同比例聯(lián)合使用的效果進(jìn)行比

8、較，結(jié)果顯示Art（10μg/ml)與