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1、PPARα信號通路基因與牦牛肌內(nèi)脂肪酸含量相關(guān)分析第一部分文獻(xiàn)綜述1．1牦牛簡介牦牛(Bosgrunniens)是適應(yīng)海拔2500~6000m高寒地區(qū)環(huán)境的特有牛種，其主要分布在我國青藏高原及其毗鄰地區(qū)。中國擁有牦牛1400多萬頭，約占全世界牦牛數(shù)量的92%以上，其主要分布在青海、西藏、四川、甘肅、新疆和云南等六個省的高寒草原區(qū)[1]。中國牦牛主要包括12個品種和1個人工培育品種，分別為分布在青海省的環(huán)湖牦牛、長毛型牦牛、青海高原牦牛；分布在西藏的帕里牦牛、西藏高山牦牛和斯布牦牛；分布在四川的九龍牦牛和麥洼牦牛；分布在甘肅的天祝白牦牛和甘南牦牛；分布在新疆
2、的巴州牦牛以及分布在云南的香格里拉牦牛；1個人工培育品種為大通牦牛[2,3]。牦牛具有適應(yīng)能力強(qiáng)，耐寒冷，耐粗飼，抗病能力強(qiáng)等特點(diǎn)，從而能夠在空氣含氧量低，氣候寒冷，牧草生長季短的高寒草地環(huán)境條件下生存并繁衍，為當(dāng)?shù)啬撩裉峁┤?、奶、皮、毛及役力等必需的生產(chǎn)和生活資料。牦牛肉以高蛋白質(zhì)和低脂肪的特點(diǎn)而名列肉類前茅，是世界各地消費(fèi)者非常喜歡的肉品之一。甘南牦牛肉蛋白質(zhì)含量為21.43%，脂肪含量為3.13%，干物質(zhì)含量為26.56%；Cu，F(xiàn)e，Zn，K元素含量較高，其中Cu，F(xiàn)e的含量分別為0.57mg/100g和2.34mg/100g，極顯著高于黃牛；牦牛
3、肉中氨基酸總量(TAA)為88.20g/100g干樣，必需氨基酸(EAA)含量為35.68g/100g干樣，均高于黃牛肉中相應(yīng)指標(biāo)[4]。牦牛肉因其具有較高的蛋白含量和其它營養(yǎng)物質(zhì)含量可以為低蛋白飲食群體，特別是為兒童和孕期婦女提供有價值的營養(yǎng)補(bǔ)充。牦牛肉中含有的共扼亞油酸（CLA），具有抗腫瘤、抗氧化、降低動物和人體膽固醇以及甘油三脂和低密度蛋白膽固醇、抗動脈粥樣硬化、提高免疫力、提高骨骼密度、防治糖尿病等多種重要功能，對減肥和改善肌肉組織也有很好的作用。從食品營養(yǎng)科學(xué)的角度考慮，牦牛肉營養(yǎng)價值無可厚非，但是牦牛肉在嫩度等指標(biāo)上比其它牛肉稍遜一籌[5]。
4、.1.2脂肪及其脂肪酸目前評價肉品質(zhì)的主要指標(biāo)有肉色、pH值、系水力、肌內(nèi)脂肪含量、嫩度和口感風(fēng)味等。肌肉內(nèi)脂肪均勻地分布于肌肉組織，并且富含磷脂，約占整個組織脂肪的20％-50％，而磷脂是影響肉品揮發(fā)性風(fēng)味成分的重要前體物，因此，肌內(nèi)脂肪與肉品風(fēng)味有很大的關(guān)系。同時，當(dāng)肌束間積聚脂肪，結(jié)締組織失去彈性，肌束容易分離，可以使肌肉變得容易咀嚼。脂肪的主要成份為甘油三酯(Triglyceride)，是由1個甘油分子和3個長鏈的脂肪酸分子組成的，其中甘油的分子比較簡單，而脂肪酸的種類和長短卻不相同，因此脂肪的性質(zhì)和特點(diǎn)主要取決于脂肪酸，不同食物中的脂肪所含有的脂
5、肪酸種類和含量不一樣，因此可形成多種甘油三酯。自然界有40多種脂肪酸，脂肪酸一般由4個到24個碳原子組成，其中16個、18個和20個碳原子的鏈最為常見。脂肪酸在有充足氧供給的情況下，可氧化分解為CO2和H2O，并釋放大量能量，是機(jī)體主要能量之一。肌內(nèi)脂肪酸是一個影響嫩度、多汁性、剪切力、適口性及pH值等肉質(zhì)性狀的重要因素[6,7]，適當(dāng)提高肌內(nèi)脂肪酸的含量、優(yōu)化肌內(nèi)脂肪酸結(jié)構(gòu)，可提高肉產(chǎn)品的適口性[8]。與一些從國外引進(jìn)的體形大、生長快的畜禽品種相比，國內(nèi)一些地方品種的肉產(chǎn)品口感較好，深受消費(fèi)者青睞，其重要原因之一就是肌內(nèi)脂肪酸的含量較高，且分布均勻[9]
6、。因此肌內(nèi)脂肪酸是影響動物肉品質(zhì)的重要因素之一，已經(jīng)成為近年來研究的重點(diǎn)。.第二部分材料與方法2.1試驗(yàn)動物的及組織樣品的采集組織樣采自甘南藏族自治州營養(yǎng)水平一致的健康成年牦牛和黃牛的12~13肋骨處背最長肌(各8頭)。用于提取RNA的組織置于液氮中保存，用于測定肌內(nèi)脂肪酸組成的肌肉組織在排酸24h后于4℃保存。.2.2背最長肌脂肪酸組成測定取背最長肌樣品約10g，破碎后溶于60mL氯仿-甲醇(1:1)溶液，樣品均化后浸提24h，取下層氯仿溶液，65℃水浴加熱揮干后，加入2mL石油醚與苯的混合試劑(1:1)使之溶解，再加入5mL2mol/LKOH-CH3O
7、H(1:1)溶液，室溫靜置30min后，加入蒸餾水使全部石油醚甲酯溶液上升分層，取上清液進(jìn)行GC-MS分析。氣象色譜條件：程序升溫至160℃，保持2min，以5℃/min的速度升溫至220℃，保持1min，以8℃/min的速度升溫至230℃，保持1min；進(jìn)樣口250℃，分流比60:1，載氣為He氣，流速為1.2mL/min；質(zhì)譜條件：電離方式EI，離子源溫度：250℃，電子能量：70eV，溶劑延遲：1.8min，電子倍增器：1105kV，全掃描方式，掃描范圍：30~450aum，掃描速度：563/s。數(shù)據(jù)均以平均值加標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示，
8、并使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。2.6候選基因的克隆2
