notch信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)與涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

《notch信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)與涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、Notch信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)與涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系作者：盧友光佘林林李嵩張聲丁林燦【摘要】目的篩選與涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的Notch信號(hào)通路基因。方法對(duì)已構(gòu)建的涎腺腺樣囊性癌高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACCM、ACC2基因表達(dá)譜進(jìn)行生物信息學(xué)分析，在與Notch信號(hào)通路基因進(jìn)行比對(duì)后，篩選出差異基因，通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)相關(guān)基因的表達(dá)差異進(jìn)行初步驗(yàn)證。結(jié)果涎腺腺樣囊性癌的表達(dá)譜中有46個(gè)基因與Notch信號(hào)通路有關(guān)。驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，Notch1,Notch2,Notch4，CHUK，F(xiàn)OXC1，F(xiàn)ZD2，F(xiàn)ZD3，GBP2和RU

2、NX1在2個(gè)細(xì)胞株中的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同時(shí)Notch1在發(fā)生轉(zhuǎn)移的涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)明顯高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的涎腺腺樣囊性癌（P<0.05）。結(jié)論Notch信號(hào)通路中的多個(gè)基因可能參與了涎腺腺樣囊性癌的發(fā)生和發(fā)展；Notch1的表達(dá)與涎腺腺樣囊性癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】癌，腺樣囊性；涎腺腫瘤；聚合酶鏈反應(yīng)；細(xì)胞，培養(yǎng)的；基因表達(dá)；信號(hào)傳導(dǎo)涎腺腺樣囊性癌是口腔唾液腺常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，該腫瘤的惡性程度高，術(shù)后易于復(fù)發(fā)，患者預(yù)后較差。目前認(rèn)為多種分子涉及該腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移，包括P53、P16、

3、P27、MMPs等。Notch信號(hào)通路是一條古老的信號(hào)通路，相鄰細(xì)胞通過(guò)Notch信號(hào)通路的傳遞，決定細(xì)胞的增殖或凋亡，它參與胚胎發(fā)育，T細(xì)胞的發(fā)育，以及維持造血干細(xì)胞自我更新等。筆者采用第二代差異顯示技術(shù)構(gòu)建了涎腺腺樣囊性癌高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的基因表達(dá)譜，通過(guò)生物信息學(xué)分析和半定量RTPCR，發(fā)現(xiàn)Notch基因家族4個(gè)成員在ACC2，ACCM2個(gè)細(xì)胞株間存在表達(dá)差異[1]。本研究采用熒光定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證Notch基因家族在這2個(gè)細(xì)胞株中表達(dá)的差異，分析Notch信號(hào)通路42個(gè)主要相關(guān)基因表達(dá)的變化，尋找與涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的基

4、因。1材料與方法1.1材料人涎腺腺樣囊性癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACCM和低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株ACC2由上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院口腔頜面外科腫瘤實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。其中ACCM為ACC2經(jīng)過(guò)裸鼠體內(nèi)連續(xù)傳代培養(yǎng)分離出的高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株。免疫組織化學(xué)標(biāo)本為福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理確診為涎腺腺樣囊性癌的腫瘤石蠟組織標(biāo)本，其中發(fā)生轉(zhuǎn)移者11例，未轉(zhuǎn)移者14例。1.2主要試劑和儀器Trizol試劑（美國(guó)Invitrogen公司）；PrimeScriptRTreagentKit、SYBRPremixExTaq(日本TaKaRa公司)；Notch

5、1兔多克隆抗體(美國(guó)Neomarker公司)；UltraSensitiveSP超敏試劑盒、磷酸鹽緩沖液PBS、檸檬酸鹽抗原修復(fù)液、加強(qiáng)型DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）。MastercyclerGradient5331PCR儀(德國(guó)Eppendorf公司)；TP800熒光定量PCR儀(日本TaKaRa公司)；GeneSnap凝膠成像系統(tǒng)(英國(guó)SynGene公司)；石蠟自動(dòng)包埋脫水機(jī)、連續(xù)切片機(jī)（德國(guó)LEica公司）。1.3篩選Notch信號(hào)通路相關(guān)基因根據(jù)2.2Notch1在轉(zhuǎn)移及非轉(zhuǎn)移涎腺腺樣囊性癌組織中的表達(dá)通過(guò)S

6、P三步法，鏡下可見(jiàn)Notch1蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色或棕褐色顆粒，在涎腺腺樣囊性癌的腫瘤細(xì)胞中散在表達(dá)。在腺樣管狀型中，陽(yáng)性細(xì)胞主要位于腺管樣結(jié)構(gòu)，而在實(shí)性型中則散在分布在癌細(xì)胞團(tuán)中（圖2A、B）。在發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的病例中，Notch1蛋白的染色深度及染色細(xì)胞數(shù)明顯強(qiáng)于無(wú)轉(zhuǎn)移者，在11例轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)病例中，有7例呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖2C），占63.6%；而在無(wú)轉(zhuǎn)移病例中僅14.3%（圖2D）。兩者病例表達(dá)情況見(jiàn)表2。表2Notch1蛋白在涎腺腺樣囊性癌的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)病例中的表達(dá)A:卵巢癌陽(yáng)性對(duì)照組織,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒,蛋白表達(dá)位于細(xì)胞

7、質(zhì);B:涎腺腺樣囊性癌陰性對(duì)照組織,蛋白沒(méi)有表達(dá);C:復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的涎腺腺樣囊性癌,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)深棕黃色顆粒,蛋白表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì);D:未發(fā)生轉(zhuǎn)移的涎腺腺樣囊性癌,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)淡棕色顆粒,蛋白表達(dá)于細(xì)胞質(zhì).3討論Notch信號(hào)通路是一條古老的通路，其與胚胎發(fā)育、T細(xì)胞發(fā)育，以及維持造血干細(xì)胞的自我更新密切相關(guān)。目前研究表明，腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、先天性發(fā)育異常等都與該通路表達(dá)異常有關(guān)。Parr等通過(guò)RTPCR技術(shù)得出，Notch1和Notch2在乳腺癌的病人中的表達(dá)高于正常乳腺組織；并且在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展上起不同作用。Notch1在低分化

8、的乳腺瘤中表達(dá)增加而Notch2的表達(dá)下降，但在分化良好的乳腺癌中出現(xiàn)高表達(dá)；Notch2則起到抑癌作用[8]。Kobayashi等構(gòu)建急性腎損傷局部缺血在灌注損傷的小鼠模型，發(fā)現(xiàn)Delt