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1、梅毒螺旋體抗體在診斷新生兒梅毒中的應用和討論［摘要］目的：探討梅毒螺旋體(treponemapallidum,TP)抗體在診斷新生兒梅毒中的應用。方法：分別用甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)、TP-ELISA和密螺旋體顆粒凝集實驗(TPPA)法對84例確診新生兒梅毒患者與100例健康新生兒血清進行檢測。結果：三種檢測梅毒螺旋體抗體方法的靈敏度分別為51.2%、98.8%和100%,相對而言，TRUST法不適合作為診斷新生兒梅毒的初篩試驗。結論：TP-ELISA法靈敏度與特異性相對較高，操作簡便易行，建議作為診斷新生兒梅毒的初篩試驗；TPPA法由于操
2、作繁瑣復雜，可結合臨床作為新生兒梅毒的確診試驗。［關鍵詞］梅毒螺旋體抗體；新生兒梅毒；甲苯胺紅不加熱血清試驗；雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗；密螺旋體顆粒凝集實驗［中圖分類號］R759.1［文獻標志碼］A蒼白密螺旋體(treponemapallidum，TP)蒼白亞種，又稱梅毒螺旋體，是性傳播疾病梅毒的病原體。人類是梅毒螺旋體的唯一傳染源，性接觸直接傳染是最主要的傳播途徑，但患梅毒的孕婦可經(jīng)胎盤感染胎兒，多發(fā)生于妊娠4個月之后。通過胎盤梅毒螺旋體進入胎兒血流，經(jīng)血流擴散至全身，發(fā)生全身性感染，并在肝、脾、腎上腺等處大量生長繁殖，致流產(chǎn)、早產(chǎn)或死胎的發(fā)生。而
3、晚期感染成活的胎兒患有先天性梅毒(congenitalsyphilis，CS)，常出現(xiàn)特殊體征如馬鞍鼻、間質性角膜炎、先天性耳聾、鋸齒形牙等。妊娠期梅毒常無明顯癥狀，為潛伏梅毒，而新生兒先天性梅毒易誤診漏診，使新生兒身體造成不可逆轉的傷害。為了控制與避免梅毒螺旋體感染對新生兒造成巨大危害，控制先天性梅毒的發(fā)病率，規(guī)范、嚴格的產(chǎn)前梅毒篩查和先天性梅毒的早期診斷則顯得尤為重要。臨床癥狀和梅毒血清學檢測是目前臨床上對新生兒梅毒進行診斷的主要標準。新生兒先天梅毒有多種臨床表現(xiàn)，癥狀體征缺乏特異性，并可造成多臟器累及。另外，發(fā)生漏診或者誤診，往往是由于父母不知情
4、，或者故意隱瞞梅毒病史。梅毒螺旋體侵入人體后刺激人體產(chǎn)生兩類抗體，分別為宿主對螺旋體表面的脂質做出應答產(chǎn)生的非特異性抗類脂抗原抗體，與B細胞產(chǎn)生的IgM、IgG兩種特異性梅毒螺旋體抗體。梅毒血清學檢測根據(jù)使用抗原不同，分非特異性類脂質抗原檢須!1與特異性密螺旋體抗原檢測兩大類，非特異性脂質抗原檢測主要用于對梅毒的初步篩查，包括不加熱血清反應素（USR）、快速血漿反應素（RPR）及甲笨胺紅不加熱血清試驗（TRUST）等；特異性密螺旋體抗原檢測使用的抗原是梅毒螺旋體的特異成分，主要包括熒光密螺旋體抗體吸收（FTA-ABS）、密螺旋體顆粒凝集實驗（TPPA）
5、和膠體金法，這些方法常用于確診梅毒感染。由于母體IgM抗體不能通過胎盤，而胎兒B細胞只能產(chǎn)生IgM，出生3個月后才能合成IgG，故TP-IgM抗體檢測是新生兒先天性梅毒早期診斷最理想的方法。本研究對比討論了不同梅毒螺旋體抗體檢測方法在診斷新生兒梅毒中的特點與臨床應用。1資料與方法1.1一般資料選擇本院新生兒科2006年4月至2014年5月確診梅毒的新生兒84例及新生兒母親84例作為研宄對象。病例納入標準：（1）經(jīng)實驗室、病理學檢查確診為梅毒患者，符合《2015美國疾病控制中心性傳播疾病（梅毒）治療指南》；（2）患者可出現(xiàn)硬下疳、多形性皮損等臨床表現(xiàn)：（
6、3）患者簽署知情同意書，自愿參與研宄。排除標準：（1）合并心、肝、腎等其他器官嚴重器質性病變患者：（2）意識不清及精神疾病患者。其中確診為梅毒新生兒年齡lh?14d;男44例，女40例。同時選擇我院健康新生兒100例作為對照。患兒年齡為lh?6d。均采集空腹靜脈血（無溶血、脂血）23mL,離心分離血清-20°C保存待檢。1.2方法1.2.1儀器與試劑TRUST試劑盒（上海榮盛生物科技有限公司，生產(chǎn)批號:140123），TP-ELISA試劑盒（廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，生產(chǎn)批號：140319），TPPA試劑（日本富士瑞必歐株式會社珠海麗珠有限公司，生產(chǎn)批
7、號:VN40628）o1.2.2TRUST試驗該試驗以包被有心磷脂的膽固醇做為載體，與血清中的非特異性抗體發(fā)生抗原抗體反應，形成膠體微粒。血清中的抗體，與混懸于甲苯膠紅溶液中的抗原微粒反映出現(xiàn)肉眼可見的粉紅凝集塊即判斷為陽性。按試劑盒說明書要求，按1:2、1:4、1:8、1:16、1:32對待測血清進行倍比稀釋，觀察呈現(xiàn)陽性反應的最高稀釋度報告梅毒血清TRUST滴度。1.2.3TP-ELISA法檢測該檢測方法使用超聲波擊碎的Nichol株為抗原，用雙抗原夾心ELISA法，來檢測TP抗體是否存在于待測血清中。將高純度TP特異抗原包被于微孔反應板中，加入標
8、本血清和酶標的高純度TP抗原，形成TP抗原-TP抗體一酶標TP抗原夾心復合物。利用酶底物/色原
