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《cq11逆轉多藥耐藥人胃癌細胞株對多柔比星的耐藥》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、CQ11逆轉多藥耐藥人胃癌細胞株對多柔比星的耐藥：吳達龍睢鳳英張成文呂煥章【摘要】目的:探討氯喹衍生物CQ11對耐長春新堿(vincristine,VCR)人胃癌多藥耐藥(multidrugresistance,MDR)細胞株SGC7901/VCR的耐藥逆轉作用。方法：將SGC7901和SGC7901/VCR細胞分別與各種濃度的多柔比星(doxorubicin,DOX)和/或CQ11在體外共同培養(yǎng)，采用MTT法檢測其細胞毒作用；采用熒光分光光度計測定細胞內(nèi)DOX蓄積量。結果：SGC7901/VCR細胞對DOX的耐藥程度
2、是SGC7901細胞的37.5倍。1.0、2.5和5.0mol/L的CQ11分別使DOX對SGC7901/VCR細胞的敏感性分別增加到2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01)和14倍(P<0.01)。DOX蓄積實驗表明，CQ11能顯著增加SGC7901/VCR細胞內(nèi)DOX蓄積，而對SGC7901細胞內(nèi)DOX蓄積無明顯影響。結論：通過增加細胞內(nèi)DOX蓄積量，CQ11在體外能有效逆轉SGC7901/VCR細胞對DOX的耐藥性【關鍵詞】多藥耐藥;氯喹;胃癌;逆轉劑腫瘤多藥耐藥(multidrugr
3、esistance,MDR)指腫瘤細胞一旦對某種化療藥物產(chǎn)生耐藥性，同時對其它結構上無關、作用機理各異的抗腫瘤藥物也產(chǎn)生交叉耐藥性［1］。MDR是一種獨特的廣譜耐藥現(xiàn)象，是導致化療失敗的重要原因，許多天然的抗腫瘤藥物如長春新堿(vincristine,VCR)、紫杉醇等及蒽環(huán)類抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin,DOX)、柔紅霉素都極易發(fā)生MDR［1~3］。MDR主要的耐藥機理為多藥耐藥基因mdr1擴增及其蛋白產(chǎn)物P-糖蛋白(permeabilityglycoprotein,Pgp)過表達。作為一個ATP依賴
4、性的藥物轉運泵，Pgp能主動將疏水性抗腫瘤藥物泵出胞外,從而減少細胞內(nèi)藥物蓄積,增加藥物外排［3］。MDR逆轉劑，如維拉帕米和環(huán)孢菌素A，能與Pgp結合，抑制Pgp的藥物外排功能，增加耐藥細胞內(nèi)抗腫瘤藥蓄積，從而恢復細胞對抗腫瘤藥的敏感性。然而，大量的臨床研究結果表明，上述腫瘤MDR逆轉劑由于體內(nèi)毒性大，體內(nèi)難以達到有效逆轉濃度［3］。因此積極尋找高效低毒的新型MDR逆轉劑，已成為腫瘤MDR研究的熱點。氯喹CQ11圖1氯喹和氯喹衍生物CQ11的化學結構CQ11是以抗瘧藥氯喹的結構母核為基礎,經(jīng)側鏈改造而獲得的新化合物(
5、化學結構見圖1)，由本課題組合成。本研究以耐VCR人胃癌MDR細胞株SGC7901/VCR為體外模型，研究CQ11對SGC7901/VCR細胞的體外MDR逆轉效應。1材料與方法1.1藥物和試劑CQ11由本課題組自行合成,以二甲亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)溶解。MTT和DOX購自Sigma公司。1.2細胞培養(yǎng)SGC7901細胞和SGC7901/VCR細胞（將SGC7901細胞在含濃度不斷遞增的VCR的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)所獲得的耐藥細胞株）均由本室保存［4］，細胞均用含10%胎牛血清的RPMI1640
6、培養(yǎng)基，在37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)。SGC7901/VCR在含0.80mol/LVCR培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長,在正式實驗前2周撤去VCR。1.3細胞存活率測定采用MTT法測定細胞毒作用［4］。取生長旺盛SGC7901和SGC7901/VCR細胞，稀釋后接種于96孔平底培養(yǎng)板中（每孔含4.0×103細胞），置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種24h后分別加入不同濃度的DOX和/或CQ11，使液體總量達到每孔200μL;繼續(xù)培養(yǎng)72h，棄去培養(yǎng)液，每孔加MTT10μL(5.0g/LinPBS),培養(yǎng)4h,棄去MTT，每孔加DMSO15
7、0μL,在微孔板震蕩器上振蕩10min,成色產(chǎn)物溶解后用酶標儀測570nm處吸光度值。以不加藥的瘤細胞組為對照，求給藥組IC50，并計算耐藥逆轉倍數(shù)(reversalfold,RF)。1.4細胞內(nèi)DOX蓄積實驗DOX蓄積實驗參照我們以往的報道進行［2］。簡述如下：取生長旺盛的SGC7901或SGC7901/VCR細胞,調(diào)節(jié)其濃度至1.0×106/mL,加入DOX4.0μmol/L和不同濃度的CQ11(分別為0.00,0.25,0.50,1.0,2.5,5.0和10μmol/L),在37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)60min
8、,取上述溶液1.0mL,100×g離心5min,冷PBS洗2次,加入6.0mL50%乙醇-0.3mol/L鹽酸溶液,抽提2h,100×g離心10min,收集上清,在熒光分光光度計上測DOX的熒光強度(激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為488nm和590nm)。在鹽酸-乙醇溶液中加入一系列已知濃度的DOX作為標準溶液,分別測定其熒光強度,建立
