資源描述：
《cq11逆轉(zhuǎn)多藥耐藥人胃癌細(xì)胞株對(duì)多柔比星的耐藥 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、CQ11逆轉(zhuǎn)多藥耐藥人胃癌細(xì)胞株對(duì)多柔比星的耐藥吳達(dá)龍睢鳳英張成文呂煥章【摘要】目的:探討氯喹衍生物CQ11對(duì)耐長(zhǎng)春新堿(vincristine,VCR)人胃癌多藥耐藥(multidrugresistance,MDR)細(xì)胞株SGC7901/VCR的耐藥逆轉(zhuǎn)作用。方法：將SGC7901和SGC7901/VCR細(xì)胞分別與各種濃度的多柔比星(doxorubicin,DOX)和/或CQ11在體外共同培養(yǎng)，采用MTT法檢測(cè)其細(xì)胞毒作用；采用熒光分光光度計(jì)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)DOX蓄積量。結(jié)果：SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)DOX的耐藥程度是
2、SGC7901細(xì)胞的37.5倍。1.0、2.5和5.0mol/L的CQ11分別使DOX對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞的敏感性分別增加到2.2倍(P0.01)、5.5倍(P0.01)和14倍(P0.01)。DOX蓄積實(shí)驗(yàn)表明，CQ11能顯著增加SGC7901/VCR細(xì)胞內(nèi)DOX蓄積，而對(duì)SGC7901細(xì)胞內(nèi)DOX蓄積無明顯影響。結(jié)論：通過增加細(xì)胞內(nèi)DOX蓄積量，CQ11在體外能有效逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR細(xì)胞對(duì)DOX的耐藥性【關(guān)鍵詞】多藥耐藥;氯喹;胃癌;逆轉(zhuǎn)劑腫瘤多藥耐藥(multidrugresistance,MDR
3、)指腫瘤細(xì)胞一旦對(duì)某種化療藥物產(chǎn)生耐藥性，同時(shí)對(duì)其它結(jié)構(gòu)上無關(guān)、作用機(jī)理各異的抗腫瘤藥物也產(chǎn)生交叉耐藥性〔1〕。MDR是一種獨(dú)特的廣譜耐藥現(xiàn)象，是導(dǎo)致化療失敗的重要原因，許多天然來源的抗腫瘤藥物如長(zhǎng)春新堿(vincristine,VCR)、紫杉醇等及蒽環(huán)類抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin,DOX)、柔紅霉素都極易發(fā)生MDR〔1~3〕。MDR主要的耐藥機(jī)理為多藥耐藥基因mdr1擴(kuò)增及其蛋白產(chǎn)物P-糖蛋白(permeabilityglycoprotein,Pgp)過表達(dá)。作為一個(gè)ATP依賴性的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)泵，Pgp
4、能主動(dòng)將疏水性抗腫瘤藥物泵出胞外,從而減少細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積,增加藥物外排〔3〕。MDR逆轉(zhuǎn)劑，如維拉帕米和環(huán)孢菌素A，能與Pgp結(jié)合，抑制Pgp的藥物外排功能，增加耐藥細(xì)胞內(nèi)抗腫瘤藥蓄積，從而恢復(fù)細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥的敏感性。然而，大量的臨床研究結(jié)果表明，上述腫瘤MDR逆轉(zhuǎn)劑由于體內(nèi)毒性大，體內(nèi)難以達(dá)到有效逆轉(zhuǎn)濃度〔3〕。因此積極尋找高效低毒的新型MDR逆轉(zhuǎn)劑，已成為腫瘤MDR研究的熱點(diǎn)。氯喹CQ11圖1氯喹和氯喹衍生物CQ11的化學(xué)結(jié)構(gòu)CQ11是以抗瘧藥氯喹的結(jié)構(gòu)母核為基礎(chǔ),經(jīng)側(cè)鏈改造而獲得的新化合物(化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1)，由本
5、課題組合成。本研究以耐VCR人胃癌MDR細(xì)胞株SGC7901/VCR為體外模型，研究CQ11對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞的體外MDR逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。1材料與方法1.1藥物和試劑CQ11由本課題組自行合成,以二甲亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)溶解。MTT和DOX購自Sigma公司。1.2細(xì)胞培養(yǎng)SGC7901細(xì)胞和SGC7901/VCR細(xì)胞（將SGC7901細(xì)胞在含濃度不斷遞增的VCR的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)所獲得的耐藥細(xì)胞株）均由本室保存〔4〕，細(xì)胞均用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，在37℃、5%
6、CO2孵箱中培養(yǎng)。SGC7901/VCR在含0.80mol/LVCR培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長(zhǎng),在正式實(shí)驗(yàn)前2周撤去VCR。1.3細(xì)胞存活率測(cè)定采用MTT法測(cè)定細(xì)胞毒作用〔4〕。取生長(zhǎng)旺盛SGC7901和SGC7901/VCR細(xì)胞，稀釋后接種于96孔平底培養(yǎng)板中（每孔含4.0×103細(xì)胞），置CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。接種24h后分別加入不同濃度的DOX和/或CQ11，使液體總量達(dá)到每孔200μL;繼續(xù)培養(yǎng)72h，棄去培養(yǎng)液，每孔加MTT10μL(5.0g/LinPBS),培養(yǎng)4h,棄去MTT，每孔加DMSO150μL,在微孔板震蕩器
7、上振蕩10min,成色產(chǎn)物溶解后用酶標(biāo)儀測(cè)570nm處吸光度值。以不加藥的瘤細(xì)胞組為對(duì)照，求給藥組IC50，并計(jì)算耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(reversalfold,RF)。1.4細(xì)胞內(nèi)DOX蓄積實(shí)驗(yàn)DOX蓄積實(shí)驗(yàn)參照我們以往的報(bào)道進(jìn)行〔2〕。簡(jiǎn)述如下：取生長(zhǎng)旺盛的SGC7901或SGC7901/VCR細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度至1.0×106/mL,加入DOX4.0μmol/L和不同濃度的CQ11(分別為0.00,0.25,0.50,1.0,2.5,5.0和10μmol/L),在37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)60min,取上述溶液1.0mL
8、,100×g離心5min,冷PBS洗2次,加入6.0mL50%乙醇-0.3mol/L鹽酸溶液,抽提2h,100×g離心10min,收集上清,在熒光分光光度計(jì)上測(cè)DOX的熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為488nm和590nm)。在鹽酸-乙醇溶液中加入一系列已知濃度的DOX作為標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,建立DOX濃度-熒光強(qiáng)度標(biāo)
