都勻白及的組織培養(yǎng)與植株再生研究

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1、都勻白及的組織培養(yǎng)與植株再生研究摘要：近年來由于都勻本地野生白及被大量采挖，數(shù)量越來越少。因此，建立白及人工繁殖的方法，通過組織培養(yǎng)建立白及植株再生體系，實現(xiàn)都勻本地中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化大量種苗的需求。本次實驗通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，對白及進行培養(yǎng)獲得再生苗，然后進行增殖培養(yǎng)，在不同的培養(yǎng)基上人工快速繁殖，以尋找都勻G及無性快繁體系的培養(yǎng)條件。結(jié)果表明：最佳叢芽增殖培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA3ml/L+KTlml/L+2,4-Dlml/L；最佳叢芽的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA2ml/L+KT1.5ml/L+NAAlml/L。本文采集自網(wǎng)絡，本站發(fā)布的論文均是

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3、叢下、草坡或路旁濕潤處。主要分布于云南、陜西、四川、湖北、甘肅等省份，全國各地有少量栽培［3］。扁球形的假鱗莖，表面有環(huán)形紋帶，富有粘性。白及常以其塊莖根入藥，具有補肺，收斂止血，消腫生肌等功效［4-5］。近年來，隨著對白及的研究開發(fā)利用的不斷深入，白及不僅具有廣泛的藥用價值和園林價值外，也廣泛用于生產(chǎn)日用百貨，例如化妝品、高級陶瓷制造、紡織、橡膠等都需要白及的參與［6］。因為白及的利用價值，市場對白及的需求量也漸漸增大，野生資源急劇減少［7］。白及種子十分微小，在自然條件下繁殖效率低，成本高。所以采用組織培養(yǎng)繁殖十分有必要［8-10］。白及的常規(guī)組織培養(yǎng)繁殖多

4、為利用無菌播種，然后直接長大成苗的技術(shù)路線。從優(yōu)良單株為起點，保證基因一致性。通過此方法可實現(xiàn)全年均衡生產(chǎn)，更靈活地滿足市場需求，縮短生產(chǎn)周期，降低成本，從而加快推進白及中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化進程［11］。本實驗采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，對分布于貴州省都勻市地區(qū)的野生白及進行培養(yǎng)，建立無性快繁體系，為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)大量種苗奠定基礎。1材料與方法1.1材料白及(BletillastriataRchb.f.)于2015年9月采自都勻市綠茵湖社區(qū)高坡，憑證標本存黔南民族師范學院植物標本館。1.2方法1.2.1消毒滅菌假鱗莖先用75%灑精浸泡5-10s,立即用無菌水沖洗10次左右。后用

5、0.1%HgC12消毒5min,立刻用無菌水漂洗3_8次，將消毒好的外殖體接種在已滅菌好的培養(yǎng)基上，移到培養(yǎng)室進行培養(yǎng)。1.2.2培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件苗培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基或1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加相關(guān)激素.?6-芐氨基嘌呤（6BA）、激動素（KT）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）。應用正交表L16（4）4設計不同因素水平配比的培養(yǎng)基配方；pH值5.8-6.4為宜。在超凈臺工作臺中將進行滅菌處理好的G及外植體接入相應的培養(yǎng)基中，置于溫度（20±3）°C，光照強度15001x,光照時間為10h/d的條件下進行培養(yǎng)。1.2.3誘導和繼代培

6、養(yǎng)將滅菌處理好的外殖體接種到設計好的培養(yǎng)基上，每7d觀察1次，并做好相關(guān)各項記錄。1.2.4白及的生根培養(yǎng)將培養(yǎng)后的叢生芽分成單株，接種在生根培養(yǎng)基上，每7d觀察1次，并作相應記錄。2結(jié)果與分析本次實驗通過正交設計，可得16個處理梯度。每個梯度做1L的培養(yǎng)基，平均分裝在35個培養(yǎng)瓶中，每個培養(yǎng)瓶接種10個叢芽數(shù)，1周后觀察并統(tǒng)計結(jié)果。2.1叢芽的增殖培養(yǎng)由于此次實驗是在利用都勻G及的種子培養(yǎng)后的種苗為基礎進行增殖和生根培養(yǎng)，所以利用正交設計后，進行個梯度的培養(yǎng)，在實驗過程中，各個梯度都有增殖芽發(fā)生，但是統(tǒng)計下來，l/2IS+6-BA3ml/L+KTlml/L+

7、2，4-Dlml/L培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的增殖芽數(shù)最多，而且芽長勢優(yōu)良，粗壯茂盛，葉嫩綠發(fā)亮。其余的培養(yǎng)基的苗多少出現(xiàn)不同程度的問題。因此決定采用l/2MS+6-BA3ml/L+KTlml/L+2，4-Dlml/L為增殖培養(yǎng)基進行后續(xù)的增殖培養(yǎng)，并且得到了大量的優(yōu)質(zhì)組培苗。2.2叢芽的生根培養(yǎng)在正交設計實驗過程中，同時也得到Y(jié)苗的生根培養(yǎng)基。在本次試驗過程中，由于出現(xiàn)了有苗在5d后長根的現(xiàn)象，而且有根長勢正常，粗壯，長，不定根多的情況，因此在芽的生根培養(yǎng)時，直接采用這里面生根最多最好的培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，即l/2MS+6-BA2ml/L+KTl.5ml/L+NAAlm

8、l/L。3討論都勻白及在