hplc法測(cè)定大黃微波提取物中大黃酸和番瀉苷a的

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1、HPLC法測(cè)定大黃微波提取物中大黃酸和番瀉苷A的【摘要】目的建立大黃微波提取物中大黃酸、番瀉苷A兩種瀉下成分的含量測(cè)定方法。方法采用HPLC法，色譜柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇0.1%磷酸（體積比80∶20），流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，柱溫：25℃。結(jié)果測(cè)定3批提取物，大黃酸和番瀉苷A平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為7.24mg/g和10.28mg/g。結(jié)論本法簡(jiǎn)單快捷，結(jié)果可靠，可作為大黃提取物中大黃酸和番瀉苷A的含量測(cè)定方法。【關(guān)鍵詞】HPLC

2、法；大黃提取物；大黃酸；番瀉苷A　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofrheinandsennosideAinextractsofrhubarbpreparedicroplesenexGeminiC18(250mm×4.6mm，5μm)columnusingmethylalcohol0.1%H3PO4(80∶20)asmobilephase．ThefloL/minandUVdetection．Thecolumntemperatureg/gand10.28mg/g,rep

3、ectively．ConclusionThemethodissimpleandreproducible，palmatumL．)；大黃提取物（自制）?！　　　〖状紴樯V純（Merk公司），超純水為自制，其余試劑均為分析純?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件色譜柱：PhenomenexGeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇0.1%磷酸（體積比80∶20），流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，柱溫：25℃，進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)以番瀉苷A計(jì)算應(yīng)不低于11000?！　?.2對(duì)照品

4、溶液的制備精密稱取大黃酸對(duì)照品1.0mg、番瀉苷A對(duì)照品10mg，分別置50mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別得到大黃酸對(duì)照品貯備液和番瀉苷A對(duì)照品貯備液。進(jìn)樣前用0.45μm微孔濾膜濾過。精密吸取兩種對(duì)照品貯備液各3mL，置同一個(gè)10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻,按“　　2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，得對(duì)照品溶液色譜圖，見圖1?！　?.3供試品溶液的制備　　HPLC法測(cè)定大黃微波提取物中大黃酸和番瀉苷A的含量精密稱取大黃微波提取物適量(約含生藥0.5g)，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20mL，超聲提取30min，濾

5、過。濾渣重新置具塞錐形瓶中，加入三氯甲烷20mL，超聲再提取30min，濾過。濾渣加2.5mol／LH2SO415mL，電熱套加熱1h，冷卻至室溫，加入三氯甲烷15mL回流30min，冷卻后置分液漏斗中，分出三氯甲烷液，重復(fù)萃取3次，合并三氯甲烷液，蒸餾水洗至中性，與水解前三氯甲烷提取液合并，回收三氯甲烷至干。殘?jiān)c甲醇提取液合并，加甲醇定容至100mL，得供試品溶液I，備用。進(jìn)樣前用0.45μm微孔濾膜濾過。精密量取上述供試品溶液Ⅰ10mL，定容至50mL，得供試品溶液Ⅱ。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別將供試品溶液Ⅰ和

6、供試品溶液Ⅱ進(jìn)樣，結(jié)果見圖2?！　?.4線性關(guān)系考察精密吸取“2.2”項(xiàng)下兩種對(duì)照品貯備液各1、2、3、4、5mL，依次置于5個(gè)10mL容量瓶，兩對(duì)照品貯備液混合，加甲醇至刻度，搖勻。分別進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積(A)對(duì)質(zhì)量濃度(ρ)進(jìn)行線性回歸，得大黃酸的回歸方程A=51132ρ-28610，r=0.9999，線性范圍2.04～10.20mg/L；番瀉苷A的回歸方程A=170.29ρ-29.691，r=0.9997，線性范圍20.2～101.1mg/L?！　?.5精密度試驗(yàn)取同一濃度的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)

7、算RSD值，得到大黃酸的RSD=0.03%，番瀉苷A的RSD=0.43%。　　2.6重復(fù)性試驗(yàn)取供試品溶液Ⅱ和供試品溶液Ⅰ，各連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定大黃酸和番瀉苷A的峰面積，計(jì)算RSD值，得到大黃酸的RSD=0.03%，番瀉苷A的RSD=0.54%?！　?.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，分別測(cè)定大黃酸和番瀉苷A的峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果得到大黃酸的RSD=0.9%，番瀉苷A的RSD=2.0%。表明樣品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定?！　?.8加樣回收率試驗(yàn)取已知濃度的大黃微波提取物適量，精

8、密稱定，精確加入對(duì)照品，余同“2.3”項(xiàng)下操作，測(cè)定大黃酸和番瀉苷A的峰面積，計(jì)算大黃酸和番瀉苷A加樣回收率，結(jié)果見表1。表1大黃酸和番瀉苷A加樣回收率（略）　　2.9樣品測(cè)定取大黃微波提取工藝提取物3批，按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果見表2。表2大黃提取物中大黃酸和番瀉苷A含量（略）　　3討論　　3