hplc法測(cè)定大黃蟲(chóng)片中芍藥苷的含量

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1、HPLC法測(cè)定大黃蟲(chóng)片中芍藥苷的含量大黃蟲(chóng)片由熟大黃、土鱉蟲(chóng)、水蛭、白芍等12味中藥組成,具有活血破瘀、通經(jīng)消痞功效,用于瘀血內(nèi)停,腹部腫塊,肌膚甲錯(cuò),目眶黯黑,潮熱羸瘦,經(jīng)閉不行。本試驗(yàn)采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定大黃蟲(chóng)片中芍藥苷的含量,可更好地控制該制劑的質(zhì)量。　　1儀器與試藥Agilent1100系列高效液相色譜儀：G1311A四元泵,G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器,G1379A脫氣機(jī),G1314Vm×250mm,5μm),流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)[1],流速1.0mL/min,柱溫30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm,進(jìn)樣量為10μL?！　?

2、.2溶液的制備　　2.2.1對(duì)照品溶液的制備　　精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1mL含芍藥苷40μg的溶液,作為對(duì)照品溶液?！　?.2.2供試品溶液的制備　　取本品20片,研細(xì),精密稱取2g,置錐形瓶中,加稀乙醇50mL,超聲提取(功率220in,放冷,過(guò)濾,蒸干。殘?jiān)酉∫掖歼m量使溶解,通過(guò)中性氧化鋁柱(100～200目,4g,內(nèi)徑15mm),以稀乙醇洗脫,收集洗液50mL,蒸干,殘?jiān)孟∫掖既芙?并轉(zhuǎn)移至20mL量瓶中,用稀乙醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得?！　?.2.3陰性對(duì)照溶液的制備　　按處方比例和工藝,制成不

3、含白芍藥材的陰性對(duì)照品,按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液并測(cè)定。　　2.3空白試驗(yàn)　　按上述色譜條件,吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL,分別注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰,而陰性對(duì)照在此保留時(shí)間無(wú)干擾(見(jiàn)圖1)。數(shù)學(xué)論文發(fā)表　　2.4線性關(guān)系考察精密稱取芍藥苷對(duì)照品,加甲醇制成濃度分別為10.0、20.0、30.0、40.0、60.0、90.0μg/mL的系列溶液,分別進(jìn)樣10μL,在上述色譜條件下測(cè)定峰面積。以芍藥苷的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為

4、：Y＝2437.0X＋35.1,r＝0.9997,表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.10～0.90μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.5精密度試驗(yàn)精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(40μg/mL)10μL,按上述色譜條件,分別連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積,結(jié)果芍藥苷峰面積的平均值為1036.86,RSD＝0.91%,表明本法精密度良好?！　?.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)為860003)樣品,按供試品溶液的制備方法平行制備6份,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果芍藥苷含量的平均值為0.2923mg/片,RSD＝1.68%。表明本法的重復(fù)性良好?！　?.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)為860003)樣

5、品,按供試品溶液制備方法制備,按上述色譜條件,分別在0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣1次,測(cè)定峰面積,結(jié)果芍藥苷峰面積的平均值為1238.26,RSD＝1.45%。表明供試品溶液在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。數(shù)學(xué)論文發(fā)表　　2.8加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的同批號(hào)(批號(hào)為860003,含量0.291mg/片)樣品約1g,精密稱取6份,分別精密加入芍藥苷對(duì)照品適量,按供試品溶液制備方法制成供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算。結(jié)果芍藥苷的平均回收率為99.98%,RSD＝0.81%。見(jiàn)表1。表1加樣回收率測(cè)定結(jié)果（略）　　2.9樣品測(cè)定取樣品約2g,精密稱定,照“2.2.2”項(xiàng)下

6、方法制成供試液,精密吸取10μL注入液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,以外標(biāo)法計(jì)算樣品中芍藥苷的含量,結(jié)果見(jiàn)表2。表2芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果（略）　　3討論芍藥苷對(duì)照品甲醇溶液在紫外分光光度計(jì)掃描下,最大吸收波長(zhǎng)為230nm,故選定230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。在供試品溶液的制備中,曾采用甲醇、75%乙醇、稀乙醇作為溶劑,對(duì)超聲和回流提取進(jìn)行了比較試驗(yàn)。結(jié)果表明,采用稀乙醇超聲提取與采用稀乙醇回流,測(cè)得的含量高且一致,但超聲處理方法簡(jiǎn)單快速,故選用稀乙醇超聲處理直接提取樣品。同時(shí)進(jìn)行了超聲提取時(shí)間的考察,分別超聲30、40、50、60min,結(jié)果超聲40min可基本提取完全。在

7、用稀乙醇洗脫時(shí),曾收集洗液40、50、60、80mL進(jìn)行比較試驗(yàn),測(cè)得的含量表明,收集洗液50mL已洗脫完全。　　　本試驗(yàn)曾使用乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液等不同比例作流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明,以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)作流動(dòng)相,芍藥苷峰與其他雜質(zhì)峰較好分離。數(shù)學(xué)論文發(fā)表本試驗(yàn)采用HPLC法對(duì)大黃蟲(chóng)片中芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定,方法簡(jiǎn)單,易于操作,分離效果好?！?/p>