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《大鼠延髓背角淺層內(nèi)cgrp陽性終末與gaba及甘》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、大鼠延髓背角淺層內(nèi)CGRP陽性終末與GABA及甘【關(guān)鍵詞】甘氨酸關(guān)鍵詞:GABA;甘氨酸;延髓;免疫電鏡;大鼠摘要:目的觀察大鼠延髓背角（MDH，三叉神經(jīng)脊束核尾側(cè)亞核）淺層（Ⅰ，Ⅱ?qū)樱﹥?nèi)降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）陽性終末與γ-氨基丁酸（GABA）能和甘氨酸（Gly）能神經(jīng)元的突觸聯(lián)系.方法包埋前GABA或Gly免疫組織化學(xué)染色方法結(jié)合包埋前CGRP免疫金標(biāo)記電鏡技術(shù).結(jié)果GABA或Gly陽性產(chǎn)物廣泛分布于神經(jīng)元胞體、軸突和樹突內(nèi)，CGRP陽性標(biāo)記主要見于無髓和薄髓軸突內(nèi).約53%和51%的CGRP陽性軸突終末分別與GABA和Gly
2、陽性神經(jīng)元的胞體或樹突形成非對(duì)稱性突觸，其中的多數(shù)為軸-樹突觸，軸-體突觸較少.結(jié)論含CGRP的初級(jí)傳入纖維直接與MDH淺層內(nèi)的GABA能及Gly能抑制性中間神經(jīng)元形成突觸聯(lián)系. Keyedullaoblongata;microscope，immunoelectron;rats Abstract:AIMToinvestigatethesynapticconnectionsbe-tmunoreactive（CGRP-ir）terminalsandγ-aminobutyricacid（GABA）-andglycine（Gly）-irn
3、euronsinthesuperficiallayers（laminaeIandII）ofratmedullarydorsalhorn（MDH）.METHODSPre-embeddingimmunohistochemicaldetectionofGABAorGly，binedbeddinggoldmarkingtechnique，munoreactivity.RESULTSDenselystainedGABA-andGly-irneuronalcellbodiesasinaeⅠandⅡoftheMDH，munoreactivityai
4、nlyyelinatedandunmyeli-natedaxonsandtheirterminals.About53%ofCGRP-irter-minalsmadeasymmetricsynapsesinalsajorityofinorityaticsynaps┐es.CONCLUSIONCGRP-containingprimaryafferentfibersmakedirectsynapticconnectionsinaeⅠandⅡoftheratMDH. 0引言 延髓背角（MDH，三叉神經(jīng)脊束核尾側(cè)亞核）的淺層（Ⅰ，Ⅱ?qū)樱┯赏?/p>
5、射神經(jīng)元和中間神經(jīng)元構(gòu)成，主要接受傳遞面口部傷害性信息的初級(jí)傳入纖維［1，2］.MDH淺層內(nèi)有γ-氨基丁酸（GABA）和甘氨酸（Gly）能的抑制性中間神經(jīng)元，它們?cè)谕庵軅π孕畔⑾蛑袠袀鬟f的過程中，發(fā)揮著重要的調(diào)控作用.P物質(zhì)（SP）和降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）是三叉神經(jīng)節(jié)發(fā)出的無髓或薄髓初級(jí)傳入纖維的神經(jīng)活性物質(zhì)，主要參與傷害性信息向MDH的傳遞［3，4］.我們以往的研究觀察到含SP的初級(jí)傳入終末與GABA和Gly能神經(jīng)元形成突觸聯(lián)系［5］.本研究用包埋前GABA或Gly免疫組化染色方法結(jié)合包埋前CGRP免疫金標(biāo)記的電鏡技術(shù)，對(duì)M
6、DH淺層內(nèi)CGRP陽性終末與GABA及Gly能抑制性中間神經(jīng)元的突觸聯(lián)系進(jìn)行了觀察. 1材料和方法 1.1材料①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠8只，體質(zhì)量200～250g，雌雄不拘，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;②實(shí)驗(yàn)儀器PhilipsCM100電子顯微鏡. 1.2方法 1.2.1取材在ip戊巴比妥鈉（100mg・kg-1）的深麻醉狀態(tài)下開胸，經(jīng)左心室插管至升主動(dòng)脈，先用100mL生理鹽水沖洗血液，再灌注500mL含40g・L-1多聚甲醛、2g・L-1苦味酸和0.5g・L-1戊二醛的
7、0.1mol・L-1磷酸緩沖液（PB;pH7.3），持續(xù)1.5～2.0h.灌注完畢立即取腦并置于上述新鮮固定液中后固定4～6h.振動(dòng)切片機(jī)冠狀切腦干，片厚40μm，切片分2組收集.經(jīng)冷凍保護(hù)后，用液氮對(duì)切片進(jìn)行凍融，以增強(qiáng)抗體穿透細(xì)胞膜的能力.再將切片置入含0.2L・L-1正常羊血清的0.05mol・L-1Tris鹽酸緩沖鹽（TBS）溶液中孵育0.5h，以阻斷非特異性免疫反應(yīng). 1.2.2免疫細(xì)胞化學(xué)染色切片經(jīng)0.05mol・L-1磷酸緩沖鹽溶液（PBS;pH7.4）漂洗后，用
8、ABC法對(duì)第1組切片在室溫下進(jìn)行GABA/CGRP的免疫細(xì)胞化學(xué)染色，步驟如下:將切片在豚鼠抗GABA血清（1∶1000;Chemicon）和兔抗CGRP血清（1∶1000;Incstar）的混合液中孵育24h;用結(jié)合有
