哮喘小鼠肺內(nèi)cgrp免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維的變化

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1、哮喘小鼠肺內(nèi)CGRP免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維的變化　　摘要:目的探討B(tài)ALB/c小鼠哮喘后肺內(nèi)CGRP免疫陽性神經(jīng)纖維分布及形態(tài)變化.方法成年雄性小鼠隨機分為正常組和哮喘組，采用免疫組織化學(xué)法觀察小鼠肺內(nèi)CGRP免疫反應(yīng)神經(jīng)纖維的變化.結(jié)果哮喘組肺內(nèi)CGRP免疫反應(yīng)神經(jīng)纖維數(shù)量及分布發(fā)生了顯著變化，從肺內(nèi)支氣管到終末細支氣管均有較密集的CGRP免疫反應(yīng)陽性纖維分布，成束走行，以平滑肌外層和粘膜下層為主.此外，粘膜表面可見裸露的陽性纖維.哮喘組與正常對照組比較CGRP免疫反應(yīng)陽性纖維的數(shù)量顯著增加（P<0.01）.結(jié)論肺內(nèi)

2、CGRP免疫反應(yīng)神經(jīng)纖維增生與哮喘發(fā)病密切相關(guān)，并可能是導(dǎo)致哮喘持續(xù)和發(fā)展的原因之一.　　Keya;calcitoningene-relatedpeptide;nervefibers;immunohistochemistry;mouse　　Abstract:AIMToinvestigatethechangesofdistributionofthecalcitoningenerelatedpeptide（CGRP）inthelungsofasthmaticmice.METHODSThemiceagroupandcontrol

3、group.ImmunohistochemistryandputerimageanalysisbersofCGRP-IRpositivefibersinairagroup.Thepositivefiberserginglikeastringofbeads，andappearingaslargefiberbundles，especiallyonthesmoothmusclelayerandbasementmembrane.Inaddition，nudeCGRP-IRpositivefibersucosa.Thenumbers

4、ofpositivefiberagroup（P<0.01）.CONCLUSIONThereiscloserela-tionshipbeta，aybeareasonforpersistenceandprogressofasthma.　　0引言　　近年來隨著有關(guān)神經(jīng)肽研究的不斷深入，證實呼吸道廣泛存在著神經(jīng)肽網(wǎng)，神經(jīng)肽與哮喘的發(fā)病關(guān)系日益受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注.有研究表明，哮喘時患者肺泡灌洗液及血液CGRP含量明顯高于對照組［1］，提示CGRP可能參與了哮喘的發(fā)病過程.然而對哮喘時CGRP增多的確切原因尚不清楚.已知CGR

5、P在肺內(nèi)尤其在粘膜及粘膜下主要分布于迷走神經(jīng)傳人纖維內(nèi)，通過軸索反射釋放或迷走反射能導(dǎo)致血管擴張、通透性增加、炎性細胞尤其是嗜酸性細胞在氣道周圍浸潤.含CGRP纖維在肺內(nèi)分布多寡或（和）其活性增高可能是造成氣道高反應(yīng)性的原因之一.我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法結(jié)合圖像分析技術(shù)研究了哮喘時肺內(nèi)CGRP免疫反應(yīng)（CGRP-IR）陽性纖維的分布和形態(tài)改變，為探明哮喘的機制提供實驗依據(jù).　　1材料和方法　　1.1材料成年雄性BALB/c小鼠20只，體質(zhì)量18～20g，本校實驗動物中心提供.隨機分為2組，即哮喘組和對照組.　　1.2方法①

6、哮喘組按文獻［2］復(fù)制小鼠哮喘動物模型，即實驗的第0日腹腔內(nèi)注射100g・L-1卵白蛋白0.2mL;第15日開始吸入10g・L-1卵白蛋白氣溶膠30min，每日1次，連續(xù)14d.對照組用生理鹽水代替卵白蛋白.②于實驗第30日以戊巴比妥鈉（40mg・kg-1，ip）麻醉豚鼠，開胸經(jīng)主動脈灌注10mL生理鹽水，繼以新配制的4℃40g・L-1多聚甲醛PB溶液（0.1mol・L-1，pH7.4）50mL持續(xù)灌注10min，取出肺臟，4℃40g・L-

7、1多聚甲醛后固定24h，入200g・L-1蔗糖PB溶液中，4℃過夜.③HE染色:恒冷箱切片，片厚8μm，貼片于10g・L-1明膠+50mg・L-1硫酸鉻鉀處理過的載玻片上，室溫干燥30min后，常規(guī)HE染色.④免疫組織化學(xué)染色，片厚14μm，貼于載玻片上，室溫干燥30min后，以0.01mol・L-1KPBS（pH7.4）浸洗，經(jīng)800mL・L-1甲醇+30mL・L-1H2O2封閉15min，入30mL・L-1TritonX-

8、100中30min，KPBS浸洗3×10min，切片入兔抗CGRP血清（1∶4000，Onco-geneScience）室溫孵育24h.KPBS浸洗3×10min，入結(jié)合生物素的羊抗兔IgG血清（1∶500，Sigma），室溫孵育3h，KPBS浸洗3×10min，入ABC復(fù)合物（1∶500，Sigma）