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《哮喘小鼠肺內(nèi)cgrp免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維的變化論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、哮喘小鼠肺內(nèi)CGRP免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維的變化論文.freela;calcitoningene-relatedpeptide;nervefibers;immunohistochemistry;mouseAbstract:AIMToinvestigatethechangesofdistributionofthecalcitoningenerelatedpeptide（CGRP）inthelungsofasthmaticmice.METHODSThemiceagroupandcontrolgroup.Immunohistochemistryandputerimagea
2、nalysisbersofCGRP-IRpositivefibersinairagroup.Thepositivefiberserginglikeastringofbeads.freeloothmusclelayerandbasementmembrane.Inaddition，nudeCGRP-IRpositivefibersucosa.Thenumbersofpositivefiberagroup（P0.01）.CONCLUSIONThereiscloserela-tionshipbeta，aybeareasonforpersistenceandprogress
3、ofasthma.0引言近年來(lái)隨著有關(guān)神經(jīng)肽研究的不斷深入，證實(shí)呼吸道廣泛存在著神經(jīng)肽網(wǎng)，神經(jīng)肽與哮喘的發(fā)病關(guān)系日益受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注.有研究表明，哮喘時(shí)患者肺泡灌洗液及血液CGRP含量明顯高于對(duì)照組［1］，提示CGRP可能參與了哮喘的發(fā)病過(guò)程.然而對(duì)哮喘時(shí)CGRP增多的確切原因尚不清楚.已知CGRP在肺內(nèi)尤其在粘膜及粘膜下主要分布于迷走神經(jīng)傳人纖維內(nèi)，通過(guò)軸索反射釋放或迷走反射能導(dǎo)致血管擴(kuò)張、通透性增加、炎性細(xì)胞尤其是嗜酸性細(xì)胞在氣道周?chē)?rùn).含CGRP纖維在肺內(nèi)分布多寡或（和）其活性增高可能是造成氣道高反應(yīng)性的原因之一.我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法結(jié)合圖像分析技
4、術(shù)研究了哮喘時(shí)肺內(nèi)CGRP免疫反應(yīng)（CGRP-IR）陽(yáng)性纖維的分布和形態(tài)改變，為探明哮喘的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).1材料和方法1.1材料成年雄性BALB/c小鼠20只，體質(zhì)量18～20g，本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.隨機(jī)分為2組，即哮喘組和對(duì)照組.1.2方法①哮喘組按文獻(xiàn)［2］復(fù)制小鼠哮喘動(dòng)物模型，即實(shí)驗(yàn)的第0日腹腔內(nèi)注射100gL-1卵白蛋白0.2mL;第15日開(kāi)始吸入10gL-1卵白蛋白氣溶膠30min，每日1次，連續(xù)14d.對(duì)照組用生理鹽水代替卵白蛋白.②于實(shí)驗(yàn)第30日以戊巴比妥鈉（40mgkg-1，ip）麻醉豚鼠，開(kāi)胸經(jīng)主動(dòng)脈灌注10mL生理鹽水，繼以新配制的4℃40
5、gL-1多聚甲醛PB溶液（0.1molL-1，pH7.4）50mL持續(xù)灌注10min，取出肺臟，4℃40gL-1多聚甲醛后固定24h，入200gL-1蔗糖PB溶液中，4℃過(guò)夜.③HE染色:恒冷箱切片，片厚8μm，貼片于10gL-1明膠+50mgL-1硫酸鉻鉀處理過(guò)的載玻片上，室溫干燥30min后，常規(guī)HE染色.④免疫組織化學(xué)染色，片厚14μm，貼于載玻片上，室溫干燥30min后，以0.01molL-1KPBS（pH7.4）浸洗，經(jīng)800mLL-1甲醇+30mLL-1H2O2封閉15min，入30mLL-1TritonX-100中30min，KPBS浸洗3×10mi
6、n，切片入兔抗CGRP血清（1∶4000，Onco-geneScience）室溫孵育24h.KPBS浸洗3×10min，入結(jié)合生物素的羊抗兔IgG血清（1∶500，Sigma），室溫孵育3h，KPBS浸洗3×10min，入ABC復(fù)合物（1∶500，Sigma）室溫孵育2h.葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸鎳胺法顯色.顯色反應(yīng)終止后，常規(guī)脫水透明，DPX封片.⑤圖像分析:以肺內(nèi)氣道為分析對(duì)象，顯微鏡下圖像分析，測(cè)量單位玻片面積內(nèi)CGRP-IR陽(yáng)性纖維條數(shù).統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:按均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行兩組t檢驗(yàn).2結(jié)果2.1正常及哮喘小鼠肺組織HE染色與正常組相比哮喘組可見(jiàn)氣道平滑肌外層
7、、粘膜下層和外層可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（Fig1），粘膜杯狀細(xì)胞增多（Fig2），大氣道周?chē)纬奢^多的淋巴樣結(jié)節(jié)組織，可見(jiàn)大量嗜酸性細(xì)胞，支氣管平滑肌增厚，管壁環(huán)行肌肥大.2.2正常小鼠呼吸道CGRP┐IR陽(yáng)性纖維分布特點(diǎn)從支氣管至終末細(xì)支氣管和肺血管均可見(jiàn)CGRP-IR陽(yáng)性纖維分布，而呼吸性細(xì)支氣管和肺泡則未見(jiàn)陽(yáng)性纖維.其分布特點(diǎn)是:①纖維主要分布于基底膜下及平滑肌外層周?chē)?②主要分布于肺內(nèi)支氣管氣道粘膜下層（Fig3）及細(xì)支氣管粘膜下層（Fig4）及平滑肌層，隨氣道口徑的變小，纖維密度逐漸減少;③纖維稀疏，呈串珠樣或節(jié)狀膨體.2.3哮喘小鼠呼吸道CGRP┐IR陽(yáng)
8、性纖維分布
