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《液態(tài)食品中脫氫乙酸含量的高效液相色譜測(cè)定方法的研究 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、液態(tài)食品中脫氫乙酸含量的高效液相色譜測(cè)定方法的研究【關(guān)鍵詞】液態(tài)食品脫氫乙酸含量高效液相色譜測(cè)定方法脫氫乙酸(DHA，Dehydroacetic)，別名二乙?；阴Ｒ宜幔虘B(tài)呈白色或淡黃色結(jié)晶粉末，無(wú)嗅、無(wú)味、熔點(diǎn)108～110℃，沸點(diǎn)270℃，是一種低毒高效防腐、防霉劑。在酸、堿條件下均有一定的抗菌作用，尤其對(duì)霉菌的抑制作用最強(qiáng)。我國(guó)自20世紀(jì)70年代中期開(kāi)始用于食品防腐劑至今，曾用于果汁、醬菜、腐乳、人造奶油、乳酸菌飲料、果醬等食品的防腐劑[1]。雖然它的抗菌作用是有效的，但是它的毒性較大的缺點(diǎn)卻限制了脫氫乙酸的廣泛應(yīng)用。脫氫乙酸能迅速被人體所吸收，進(jìn)人人體后即分散于血漿和許多器官中
2、，有抑制體內(nèi)多種氧化酶的作用。目前，脫氫乙酸的安全性受到質(zhì)疑，國(guó)際上已明確禁止使用，我國(guó)在一定范圍內(nèi)允許其使用，但最大允許使用量為0.3g/kg[2]。目前檢測(cè)脫氫乙酸的國(guó)標(biāo)方法為氣相色譜法[3]，前期樣品處理過(guò)程涉及到有機(jī)溶劑萃取、濃縮等步驟，操作起來(lái)比較麻煩，而且脫氫乙酸還容易造成色譜峰出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，使得難以獲得準(zhǔn)確的定性和定量的結(jié)果[4]。應(yīng)用高效液相色譜測(cè)定食品中脫氫乙酸的方法已見(jiàn)報(bào)道，比如采用超聲萃取、氫氧化鈉溶液浸泡等方法萃取月餅中的脫氫乙酸后再注射到色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定[5]。這些研究為應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定果汁、罐頭、瓶裝腐乳等液態(tài)食品中的脫氫乙酸做了探索性的工作。本研究在
3、國(guó)標(biāo)GB/T5009.121?2003的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)目前市場(chǎng)上廣泛銷售的多種液態(tài)食品中的脫氫乙酸以高效液相色譜的方法進(jìn)行分析，取得了比較滿意的結(jié)果，克服了氣相色譜法前處理復(fù)雜以及污染性大的缺點(diǎn)?！ ?材料與方法 1.1實(shí)驗(yàn)樣品、主要儀器與試劑 參加測(cè)定的樣品主要包括目前市場(chǎng)上銷售的果汁、腐乳、罐頭以及酸奶。HP1100型高效液相色譜儀、紫外分光光度計(jì)(上海光譜儀器公司);快速混勻器。甲醇(HPLC級(jí)，DIKMA公司);甲醇(分析純，國(guó)藥);碳酸氫鈉(優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥);脫氫乙酸(國(guó)家標(biāo)物中心);脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品100mg，用甲醇定溶至100mL。再用甲醇稀釋成1
4、、5、10、15、20、30mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾。測(cè)定用水為二次蒸餾水?！ ?.2樣品處理 果汁和酸奶混勻后直接稱取，腐乳和罐頭樣品需要先將固體物粉碎后再混勻。預(yù)先混勻的樣品稱取大約5.0g，加入到25.0ml容量瓶中，再加入10ml2%的碳酸氫鈉溶液，用雙蒸水稀釋至刻度，搖勻。靜置10min后將上清液過(guò)0.45μm濾膜，以10μl進(jìn)樣器加入到液相色譜儀測(cè)定?！ ?.3色譜條件 色譜柱C18(5um,250×4.60mm);柱溫25℃;流動(dòng)相選用甲醇?0.02mol/L乙酸銨(5:95);流速1.0mL/min;進(jìn)樣量10ul;檢測(cè)波長(zhǎng)310nm;按照這種條
5、件進(jìn)行分析，以保留時(shí)間定性，以峰面積定量，測(cè)定樣品中脫氫乙酸的濃度?！ ?.4結(jié)果計(jì)算 待測(cè)樣品中脫氫乙酸的含量(g/kg)=C×V×10-3/m 式中，C:樣品中脫氫乙酸的濃度(mg/L);V:樣品體積(mL);m:樣品質(zhì)量(g) 2結(jié)果與討論 2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 用紫外分光光度計(jì)對(duì)脫氫乙酸進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描檢測(cè)到兩個(gè)吸收峰，在310nm處有最大吸收，在230nm處有次強(qiáng)吸收。在310nm處的干擾比在230nm處要小，背景吸收少，因此選擇310nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。標(biāo)準(zhǔn)品及待檢樣品中的脫氫乙酸的檢出峰色譜圖見(jiàn)圖1，脫氫乙酸的保留時(shí)間在8.5min左右?！ ?.2流動(dòng)相的選擇 液相
6、色譜柱C18分析中常用的流動(dòng)相有甲醇?磷酸鹽緩沖溶液系統(tǒng)、甲醇?硫酸溶液系統(tǒng)以及甲醇?乙酸鹽溶液系統(tǒng)。參考以前的研究結(jié)果，從流動(dòng)相的本底吸收、靈敏度的影響和色譜柱的壽命等方面來(lái)考慮，本研究選擇了甲醇-0.02mol/L乙酸銨(5:95)。在流動(dòng)相中加入甲醇，可以提高出峰的對(duì)稱性，隨著甲醇量的增加，出峰時(shí)間明顯加快，為了避開(kāi)樣品中其它成分的干擾，將甲醇的比例調(diào)整到5%時(shí)，脫氫乙酸的出峰時(shí)間較為理想，且不受雜質(zhì)的干擾?！ ?.3測(cè)量精密度和回收率 取同一罐頭樣品10份，每5份添加同一個(gè)濃度的脫氫乙酸標(biāo)樣，分別進(jìn)行HPLC分析。從表1的結(jié)果可以看出這種方法有較好的重復(fù)性和較高的回收率，可以用
7、來(lái)進(jìn)行定量分析?！ ?.4線性實(shí)驗(yàn)和靈敏度分析 取同一果汁樣品10份，每份約5.0g，置于25mL容量瓶中，分別加入脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液(5mg/L)1ml、2ml、3ml、4ml和5ml，樣品按照標(biāo)準(zhǔn)步驟處理后取10uL進(jìn)入色譜柱測(cè)定，以出峰面積對(duì)脫氫乙酸濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果表明脫氫乙酸濃度與色譜峰面積有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9993。以信噪比(S/N)為3測(cè)得各成分的最低檢出限為0.25mg/kg?！ ?.5樣品的測(cè)定
