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1、高效液相色譜測定白果中總黃酮的含量摘要：本文綜述了利用高效液相色譜測定白果中總黃酮含量方面的研究結(jié)果。該法操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好。關(guān)鍵詞：高效液相色譜總黃酮白果銀杏系銀杏科植物，為我國特有樹種。銀杏種核又稱白果,食用歷史悠久，具有良好地食用和保健價值⑴。白果營養(yǎng)成分豐富，含有淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、維生素C、核黃素、胡蘿卜素、和鈣、磷、鐵、鉀等礦物元素，以及銀杏酸、白果酚、多糖和銀杏醇等成分［2］。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，具有如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏
2、通微循環(huán)、活化大腦及其他臟器細胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。就黃酮類成分的含量測定方法而言，國內(nèi)目前對銀杏葉中總黃酮含量的測定研究方法很多，有毛細管電泳法［3］、庫侖滴定法［4］、近紅外光譜⑸、熒光光度法⑹、分光光度法［7］、導(dǎo)數(shù)光譜法［8］、高效液相色譜法［9-10］等，但對白果中總黃酮的測定研究僅有分光光度法［ll］o本文利用高效液相色譜對白果中總黃酮含量進行測定。1儀器和試劑1.1儀器AgilentllOO高效液相色譜；FA2004電子天平（上海精密科學(xué)儀器公司）;DHG-9070A鼓風(fēng)干燥箱（上海索譜儀器
3、有限公司）；色譜柱AgilentC18（4.6mmX250mm,5um）o1.2主要試劑彳斛皮素對照品（批號：100081-200406,中國藥品生物制品檢定所）；山奈素對照品（批號：110861-200707,中國藥品生物制品檢定所）；異鼠李素對照品（批號：110860-200407,中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純），水為超純水，其他試劑均為分析純。2實驗部分2.1色譜條件采用AgilentC18色譜柱，流動相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（60?40），流速為l.Oml/min,柱溫為35°C,檢測波長為
4、360nmo在此條件下，彳斛皮素、山奈素、異鼠李素能達到較好分離。2.2工作曲線的制作各精密稱取15mgW皮素、20mgill奈素、10mg異鼠李素對照品，分別用甲醇溶解定容到10ml,即得扌斛皮素濃度為1.5mg/ml>山奈素濃度為2.0mg/ml,異鼠李素濃度為1.0mg/ml的單一成品對照品貯備液。分別吸取上述對照品貯備液各5ml至50ml容量瓶中,用甲醇定容至50ml,即得扌斛皮素濃度為0.15mg/ml>山奈素濃度為0.20mg/ml,異鼠李素濃度為0.10mg/ml的混合對照品溶液。分別吸取lml、2
5、ml>2.5ml>5ml混合對照品溶液至10ml容量瓶中，加甲醇定容至10ml,配制成系列濃度對照品溶液。吸取上述系列濃度對照品溶液10□I分別注入色譜儀，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程見表1。結(jié)果表明呈良好線性關(guān)系。表1對照品工作曲線標(biāo)準(zhǔn)品回歸方程相關(guān)系數(shù)扌斛皮素（C15H10O7）y=4014.1x+0.002R=0.9994山奈李（C15H10O6）y=3660x-0.943R=0.9998異鼠李素（C16H12O7）y=4203.7x-0.579R=0.99982.3精密度
6、試驗準(zhǔn)確吸取扌斛皮素濃度為0.075mg/ml>山奈素濃度為0.10mg/ml,異鼠李素濃度為0.05mg/ml的混合對照品溶液10卩I,重復(fù)進樣5次，記錄峰面積。榊皮素、山奈素和異鼠李素峰面積的RSD分別為1.27%、1.15%、1.40%,表明本方法精密度良好。2.4樣品的制備白果經(jīng)剝殼、去皮、打碎成漿，105°C烘15min、再60°C?80°C烘干后粉碎。準(zhǔn)確稱取500mg左右烘干粉碎后的樣品，力0100ml甲醇、超聲波處理30min后過濾，濾渣再加100ml甲醇超聲波處理30min后再過濾，合并濾液并蒸
7、去甲醇后，殘渣加甲醇硫酸（25%）25ml水浴上回流2h,冷卻后，移入100ml容量瓶，用甲醇定容。2.5樣品含量的測定取同一批白果濃縮樣3份，按2.4方法制備樣液。分別準(zhǔn)確吸取制備好的10UI,在與對照品相同色譜條件下測定進樣，記錄峰面積。按外標(biāo)法計算結(jié)果榊皮素、山奈素、異鼠李素的含量?？傸S酮含量=（榊皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量）X2.51o結(jié)果見表30總黃酮平均含量為2.306%,RSD=0.20%,結(jié)果表明本法重復(fù)性好。表3樣品含量測定結(jié)果測定次數(shù)木斛皮素含量山奈素含量異鼠李素含量總黃酮含量（％）1
8、0.37980.41920.11962.30620.37420.42300.12002.30230.38000.42220.11842.3113討論3.1色譜條件的確定3.1.1紫外檢測器波長的選擇根據(jù)藥典，檢測波長為360nmo本研究試驗了紫外波長在210nm>254nm>280nm>295nm>320nm直至360nm處的紫外吸收峰，結(jié)果顯示，在360nm處出峰正常，
